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OMIP-031: 小鼠效应和记忆T细胞亚群免疫检查点蛋白的检测

发布者: niwanmao | 发布时间: 2018-4-24 19:47| 查看数: 556| 评论数: 4|帖子模式

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T细胞一旦被激活,就开始快速增殖,众多与效应应答、支持功能相关的基因表达也会随之改变。随后就是消退期,大部分活化的T细胞死亡,只剩下少数抗原特异性T细胞转化为多种长存的记忆T细胞,以便能够在未来遇到相似抗原时再次快速激活。伴随着T细胞活化和随后的记忆形成,细胞表面蛋白表达也随之改变,因此通过这些蛋白变化,可区分出T细胞亚群并鉴定其活化或记忆状态。

OMIP系列的第31个标准化方案,是一个16色方案,可检测C57BL/6小鼠T细胞的活化状态、效应功能状态,同时检测表面上4种免疫检查点蛋白的表达量,因此是一个较完整的免疫检查点方案。

方案
屏幕快照 2018-04-24 下午7.35.15.png
在此说明一下其中的CD45.2。CD45.1和CD45.2是CD45的等位基因变种,在不同小鼠中表达不同,例如C57BL.6和Balb/c是CD45.2,FVB是CD45.1。那么为什么不用CD45呢?因为他们下一步还需要进行同源移植/输注操作,所以作者在此选择了CD45.2。大家平时如果无此需求,可用CD45代替。


设门步骤
1、通过FSC-W/FSC-H、SSC-W/SSC-H排除粘连体,然后通过DAPI/SSC排除死细胞,接着通过FSC/SSC选取淋巴细胞群体,再选择CD3+T细胞,最后通过CD4/CD8分别选择CD4+辅助T和CD8+细胞毒T进行分析。
屏幕快照 2018-04-24 下午7.10.35.png


2、通过KLRG1/CD127可区分出T细胞中SLEC和MPEC两类新近发现的效应T细胞。
SLEC即Short-lived effector cells,弱表达CD127、高表达KLRG1;
MPEC即Memory precursor cells,高表达CD127、弱表达KLRG1
通过CD44/CD27或CD45RA/CD62L可区分出初始T、中央记忆、效应记忆、效应T细胞。图中红色散点是正常小鼠脾脏细胞,蓝色为MC-38肿瘤浸润淋巴细胞。
屏幕快照 2018-04-24 下午7.10.56.png

3、最后当然是重头戏,分析各类细胞上的PD-1、LAG-3、TIM-3、CTLA-4四个免疫检查点蛋白表达情况,由于表达量均不高,所以FMO的设置非常重要。
同样,红色曲线是正常小鼠脾脏细胞,蓝色曲线为MC-38肿瘤浸润淋巴细胞。
屏幕快照 2018-04-24 下午7.12.09.png


这个方案是小鼠的,但只需将其中各个抗体换成人的,就可以用在人样本上。免疫检查点药物在临床上应用研究也是火爆异常,你不试试?


参考文献:
Nemoto S, Mailloux AW, Kroeger J, Mulé JJ. OMIP-031: Immunologic checkpoint expression on murine effector and memory T-cell subsets. Cytometry A. 2016 May;89(5):427-9. doi: 10.1002/cyto.a.22808.

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最新评论

zhao271404 发表于 2018-4-25 20:51:04
学习了,谢谢倪老师,我对靶点免疫也比较有兴趣。
qianliu_ln 发表于 2018-4-28 11:48:05
好详细的方案,学习了
dreaman 发表于 2018-5-16 09:16:31
有没有TSCM的方案?
niwanmao 发表于 2018-5-17 14:02:28
dreaman 发表于 2018-5-16 09:16
有没有TSCM的方案?

人的TSCM之前介绍过几个,例如http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2481-1-1.html
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