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OMIP-032:两管多色方案检测小鼠固有和适应性免疫亚群

发布者: niwanmao | 发布时间: 2018-5-7 19:21| 查看数: 621| 评论数: 1|帖子模式

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方案如下表,每管9~10色,所以目前主流的多色流式细胞仪基本上都够用,只需要把荧光素更换成机器适合的即可。第一管主要是分析髓系细胞,第二管主要是分析T/B/NK以及T细胞亚群/功能状态:
屏幕快照 2018-05-07 下午7.01.10.png

以下是该方案分析的亚群:
B细胞(CD45.2+CD19+)
T细胞(CD45.2+TCRβ+)
NK细胞(CD45.2+TCRβ-CD49b+NKp46+)
髓系细胞(CD45.2+CD11b+)

髓系细胞进一步分为:
树突状细胞(CD45.2+CD11b+CD11c+MHCII+,包括淋巴样DC和髓样DC)
中性粒细胞(CD45.2+CD11b+Ly6G+)
巨噬细胞(CD45.2+CD11b+Ly6G-Ly6C low,包括AAM)
单核细胞(CD45.2+CD11b+Ly6G-Ly6C high)

T细胞进一步分为:
辅助T细胞(CD45.2+TCRβ+CD8-CD4+)
细胞毒T细胞(CD45.2+TCRβ+CD4-CD8+)

这两个亚群可通过CD44和CD62L继续划分为:
效应T细胞(CD44+CD62L-)
记忆T细胞(CD44+CD62L+)
初始T细胞((CD44-CD62L+)


适合小鼠(Balb/c)乳腺组织、脾脏、肿瘤组织(均用Collagenase IV消化成单细胞),以及全血(红细胞裂解)


分析步骤如下图:
首先仍然是排除碎片、排除粘连体、排除死细胞、选择CD45.2+的免疫细胞
屏幕快照 2018-05-07 下午7.05.20.png

接着是进一步对髓系分析,B图先通过CD11c把DC排除掉,接着选择CD11b+细胞,之后通过Ly6C和Ly6G分出中性粒、单核、巨噬细胞,巨噬细胞中CD206+部分为alternatively activated macrophages (AAMs) 。C图则是选择CD11c+MHCII+的DC,并通过CD11b的表达将其细分为淋巴样DC和髓样DC。
屏幕快照 2018-05-07 下午7.06.04.png

在CD45.2+的免疫细胞中,还可通过CD19和TCRβ分为CD19+的B细胞和TCRβ+的T细胞,在CD19-TCRβ-区域中,存在一类CD49b+NKp46+的NK细胞。T细胞可进一步根据CD4和CD8 分为辅助T和细胞毒T,这两个亚群根据CD44和CD62L区分出初始、记忆、效应三个功能状态。
屏幕快照 2018-05-07 下午7.10.43.png


简单明了的方案,值得正在做小鼠模型的你收藏。


参考文献:
Unsworth A, Anderson R, Haynes N, Britt K. OMIP-032: Two multi-color immunophenotyping panels for assessing the innate and adaptive immune cells in the mouse mammary gland. Cytometry A. 2016 Jun;89(6):527-30. doi: 10.1002/cyto.a.22867.

最新评论

qianliu_ln 发表于 2018-5-9 09:34:12
满满的干货,多谢站长分享!
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