流式中文网 门户 查看主题

手把手教你分析急性淋巴细胞白血病免疫分型

发布者: niwanmao | 发布时间: 2018-10-17 10:19| 查看数: 256| 评论数: 0|帖子模式

亲爱的FLOWER,加入流式中文网,一起讨论,一起学习,享受更多福利吧!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?加入流式中文网

x
急性淋巴细胞白血病(ALL)是儿童最常见,而成人较少见的一种血液系统肿瘤,主要分为B和T两大类,分别占ALL的80~85%和15~20%。
形态学只能分出L1~L3,却无法区分B还是T,因此,流式细胞术免疫分型就显得至关重要。
有人说,用Ig链和T细胞受体(TCR)重排的分子研究也可以区分,实际上,IgH和TCR重排只支持克隆起源但不支持谱系特异性,因为TCR重排可以存在于大部分B谱系ALL中,反之亦然。
FCM诊断ALL应遵循三个具体步骤:
(1)区分B或T来源
(2)区分亚型
(3)与复发遗传异常相关的免疫表型的评估
但是,在上述步骤前,最基础的一步还是先在CD45/SSC图上圈出原始细胞。SSC很多地方喜欢用LIN,这没有问题,属于个人习惯问题,但这里演示的是SSC Log坐标,因为淋巴和单核、原始细胞在SSC Log上区分更清楚些。

第1步:CD45/SSC图上圈出原始细胞
先看正常骨髓的模板,分成以下区域,每个区域对应一类细胞,先彻底熟悉正常骨髓,方能找出异常:
2018101701.png

熟悉好正常之后,我们在正常骨髓模板上叠加B-ALL细胞,可见大多B-ALL细胞出现在CD45偏弱、SSC中等的位置,在少数MLL+的B-ALL则CD45偏强
2018101702.png

至于T-ALL,大多数都是CD45偏强些的,所以比较靠近淋巴细胞位置
2018101703.png

在开始后续的步骤之前,澄清一个观念:
很多地方,会喜欢用表达百分比来报告抗原表达率,但数字通常不能很好地说明存在异常细胞,因为它无法充分描述其免疫表型,同一个数字可能对应很多种表达形式,从而限制结果的解释。所以,应考虑半定量形式,将抗体荧光分布的定性描述为“阴性”,“阳性”,“部分表达”(相对于阴性对照群体),将抗体荧光强度为“dim”,“bright”,“heterogeneous或variant”,从而能够使医生或其它同行,即使不通过图形,也能充分了解抗原的表达情况。

第2步:B或T细胞来源的鉴定
CD7常在T-ALL中表达,具有高灵敏度,但在20%的急性髓性白血病中也可表达,因此特异性不够高。出于这个原因,需利用cyCD3的高灵敏性和高特异性,来确定T-ALL来源。
其它的T系抗原中,CD5也是个高灵敏性和特异性不错的选择,在大部分T-ALL中均表达,仅在10%的病例中(包括ETP-ALL)弱表达或阴性。
CD19的阳性足以覆盖几乎所有B细胞谱系的病例,无论CD19表达是低还是异质(例如BCR/ABL阳性ALL),但由于CD19在不少AML中也会出现伴随表达,所以B细胞系列来源必须通过cyCD79a、cyCD22和/或CD10的表达来进一步证实。
综上,可参考下表来确定ALL究竟是B或T细胞来源:
高度特异性
中度特异性
高度敏感性
中度敏感性
提示细胞群体
CD7CD7T细胞
CD3(胞内/胞膜)cyCD3T细胞
CD5CD5T细胞
CD19CD19B细胞
CD20CD20B细胞
CD10CD10B细胞
cyCD22cyCD22B细胞
cyCD79acyCD79aB细胞
cyIgMcyIgMPre B细胞
IgM k或λIgM k或λ成熟B细胞
第3步:区分ALL亚型
EGIL(European Group for the Immunological Characterization of Leukaemia)曾经出来下面这个表,区分对应B和T细胞不同发育阶段的亚型,尽管亚型的区分对于治疗和预后区别意义不太大,但有些地方还是比较倾向于此,因此仍附在这里。
B-ALL亚型区分:
2018101704.png

T-ALL亚型区分:
2018101705.png
在此,补充一种新亚型,ETP T-ALL,这个类型是由美国St Jude儿童研究医院和AIEOP-BFM小组的血液学家描述的一种新的具有预后相关性的T-ALL亚型,目前的标准是CD1a和CD8阴性,CD5通常呈阴性或弱阳性,但至少有下列抗原之一呈阳性:CD34、CD117、HLADR、CD13、CD33、CD11b和CD65,该亚型的预后还在研究中,可能跟治疗方案相关。

第4步:与复发遗传异常相关的免疫表型的评估
常见的复发遗传异常(即基因异常)相关的免疫表型,可参考下表进行评估判断:

KMT2A/AF4
TEL/AML1
BCR/ABL
E2A/PBX1
CD45pos/dimpos/dimneg/dimpos/dim
CD19pospos常dimpos
CD34pos/negpospos/negneg
CD22neg/dimdim/posdim/pospos/dim
CD20negnegdim/posdim/pos
CD24negpospospos
CD10negbrightbrightpos/dim
cyIgMnegnegnegpos
CD15常dimnegnegneg
CD65常dimnegnegneg
CD13大多neg常posposneg
CD33neg/dim常posposneg
CD66cnegnegposneg
CD9pospospospos
NG2posnegnegneg
CD25negnegposneg

第5步:出报告
流式报告,应该包含丰富而准确的免疫学信息,是医生正确评估血液疾病的重要组成部分。 AIEOP-BFM小组已经提出了FCM概要的标准化格式“Flow Diagnostics Essential (FDE) Code”,用于诊断白血病。 下面是几个示例报告样式,供参考:
(1)T-III T-ALL的报告(此处FDE指肿瘤细胞比例,i指的是胞内或核内,你也可以用cy或c。最后一行是诊断结论):
FDE: 41%;
STRONG: CD1a,2,i3,4,7,8,45,iTdT;
NEGATIVE: CD3,10,13,14,15,19,22,33,34,i79a,iMPO,TCRab,TCRgd; T-ALL T-III
(2)伴CD33表达的Pre B-ALL报告,缩写含义同上:
FDE: 65%;
STRONG: CD10,19,22,33,34,i79a,HLA-DR,iTdT;
WEAK: CD20,45;
NEGATIVE: CD3,i3,7,8,13,65,kappa,lambda,iMPO;
NOT EVALUATED: iIgM;
pre B-ALL, B-II/III
(3)成熟B-ALL报告,缩写含义同上:
FDE: 30%;
STRONG: CD10,19,20,22,i79a,HLA-DR,IgM,kappa;
WEAK: CD38,45;
NEGATIVE: CD3,i3,7,8,iMPO,lambda;
Mature B-ALL B-IV。

完整的5步看下来,还有问题吗?可点击“阅读原文”到论坛讨论。
参考文献:
Kern, W., Béné, M., & Porwit, A. (2018). Multiparameter Flow Cytometry in the Diagnosis of Hematologic Malignancies (pp. 61-74). Cambridge: Cambridge University Press. Chapter 6: Acute Lymphoid Leukaemias (ALL) and Minimal Residual Disease in ALL


最新评论

关闭

本站推荐上一条 /1 下一条

流式中文网    

联系我们: mail#flowcyto.cn (#改为@)

GMT+8, 2018-11-17 04:20

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.