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OMIP-037:单管搞定CD4+T、CD8+T、NK、iNKT、γδT的抑制受体

发布者: niwanmao | 发布时间: 2018-10-22 16:50| 查看数: 228| 评论数: 0|帖子模式

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在许多慢性疾病期间,抗原特异性CD4+和CD8+T细胞群表现出活性差、很少/没有增殖能力和不同的分子谱,这个状态被称为“功能耗竭”或“检查点抑制”。除常规T细胞外,有证据表明固有免疫细胞亚群,如NK细胞、iNKT细胞和γδ T细胞也会出现功能耗竭。
免疫细胞的功能耗竭特征,通常是表达抑制性受体如PD-1、TIM-3、CD160、LAG-3和TIGIT。
对于方案中涉及的几个功能性受体咱们逐一了解一下:

PD-1
中文译做程序性死亡受体-1。PD-1在免疫细胞表面上调后,免疫细胞即使受到刺激活化,其PD-1会与靶细胞上的配体PDL-1或PDL-2结合后,细胞增殖、细胞因子产生和存活功能均受到抑制。

TIM-3
中文译做T细胞免疫球蛋白和粘蛋白3。TIM-3在完全分化的Th1 / Tc1、Tregs和NK细胞以及单核细胞、巨噬细胞和树突细胞上表达。 TIM-3与半乳糖凝集素-9的结合导致T细胞功能抑制,并可在体外诱导T细胞凋亡。此外,在体外TIM-3交联时,NK细胞毒性功能发生缺失。

CD160
CD160已被定义为NK细胞的激活受体,然而CD160+的人T细胞在与配体HVEM(herpesvirus entry mediator)结合后,就接受到抑制信号,并且根据刺激的不同,NK细胞功能可以被CD160正向或负向调节。此外,研究还发现,CD160导致的人CD8+T细胞的功能障碍表现与PD-1不同,这说明了同时进行多个免疫抑制性受体分析,在阐明慢性病中检查点抑制的广度和机制方面非常重要。

LAG-3
中文译做淋巴细胞活化基因-3。LAG-3在几种免疫细胞群上表达,包括活化的T细胞和NK细胞。在TcR刺激T细胞后,LAG-3与TcR:CD3复合物结合,对信号转导产生负面影响。

TIGIT
中文译做具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体,是结合CD155和CD112的免疫球蛋白超家族的成员。可溶性TIGIT在体内和体外均能抑制T细胞反应。 TIGIT在癌症和慢性病毒感染中的T细胞上表达,并且抗TIGIT抗体阻断可以增强T细胞效应功能。

CTLA-4
抑制性受体CTLA-4不包括在这个方案中,因为在绝大多数情况下均未在慢性疾病患者的免疫细胞中检测到。CTLA-4蛋白主要分布在细胞内,如果进行细胞内染色,可能更容易检测到。不过今天介绍的方案主要目的是用于细胞分选,分选出目的细胞用于进一步的细胞培养/研究,故CTLA-4就不放进去。

激活标记物CD137(4-1BB)
其作为共刺激分子的确定作用,有助于维持T细胞活化,并且来自小鼠模型的数据显示当抗CD137和抗PD-1抗体联合使用,在减少肿瘤负荷中起协同作用。

CD127(IL-7Ra)
CD127是T细胞稳态的关键调节因子,CD127表达缺失与衰竭有关。对病毒特异性CD8+ T细胞的分析发现CD127表达与病毒抗原特异性CD8+ T细胞增殖呈正相关,与PD-1呈负相关。

方案
2018102201.png

改良方案:将上述方案中的CD137、CD160替换为CD25、CD45RO,就可以分析Treg(CD3+CD4+CD25+、CD127low)和记忆T细胞(CD3+CD4+/CD8+CD25 variant CD45RO+)

分析过程
通过FSC/SSC圈淋巴细胞,FSC-A/FSC-H、SSC-A/SSC-H依次排除粘连体,通过CD14/CD19/死活染料,排除掉干扰的单核/B/死细胞,剩余的细胞中,设CD3+和CD3-两个门,CD3-门往下分出NK细胞,CD3+门分出CD4+T、CD8+T、iNKT、γδT。
2018102202.png

接着,依次分析上述各免疫细胞群体中PD-1、TIM-3、CD160、LAG-3、TIGIT表达。

CD8+T
2018102203.png

γδT
2018102204.png

CD4+T
2018102205.png

这是改良方案中,将CD137、CD160替换为CD25、CD45RO,分析Treg(CD3+CD4+CD25+、CD127low)和记忆T细胞(CD3+CD4+/CD8+CD25 variant CD45RO+)及其抑制性受体表达。
2018102206.png

作者指出,大多数患者的分群并没有这么明显,此处放的是比较典型的几个图形,所以大家在平时检测的时候,一定要记得设置FMO对照,一定要记得设置FMO对照,一定要记得设置FMO对照(重要的事情说三遍)。

参考文献:
Belkina AC, Snyder-Cappione JE. OMIP-037: 16-color panel to measure inhibitory receptor signatures from multiple human immune cell subsets. Cytometry A. 2017 Feb;91(2):175-179. doi: 10.1002/cyto.a.22983.

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