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哺乳动物细胞周期同步化的方法注意点

发布者: niwanmao | 发布时间: 2018-11-9 16:48| 查看数: 192| 评论数: 1|帖子模式

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细胞周期相关的研究中一项重要任务是将细胞同步到特定的细胞周期阶段。 同步化使得细胞状态可控,能使得周期的变化更明显,更能反映药物处理的效果。
细胞同步化的方法很多,总体如下图:
2018110901.png

我们之前发过两篇帖子讲解细胞周期同步化:
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2230-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3793-1-1.html(此帖表格中有各种方法的权威原版链接)

今天把这些方法的注意点都依次总结一下:
1、Mitotic shake-off
利用分裂期细胞粘附性差的特点,通过剧烈摇晃使M期细胞脱落下来。
但如果细胞粘附性差,那么通过这种方法获得的同步细胞纯度也会很差。状态不佳的培养物或不处于对数生长的培养物,细胞产量更低。
可与诺考达唑组合,以增强同步群体的纯度,增加细胞产量。

2、Nocodazole:
如果加入诺考达唑后,细胞数量不增加甚至减少,则很可能是诺考达唑浓度太高了,导致细胞G2/M期不可逆阻滞或导致细胞死亡。降低浓度可以解决这个问题。
在倍增时间> 24小时的细胞系中,16小时可能不足以将大部分细胞积聚在G2/M期。但延长诺考达唑暴露时间的方法还是需要谨慎,因为暴露时间太长能使所有细胞退出G1和S期,但可能对长时间处于G2和M期的细胞有毒。
最后,许多肿瘤细胞系在G2/M阻滞存在缺陷,对于这些检查点缺陷细胞系,诺考达唑不是有效的同步剂。

3、血清饥饿:
通过一系列降低的血清浓度可有效同步化细胞周期(0.1%适用于大多数细胞系)。 血清戒断也可以通过完全戒断(0%血清)或用1%血清,这取决于细胞系。 必须确定每种细胞系的最佳血清浓度。
此外,细胞过于密集也会干扰细胞周期阻滞的能力。

4、氨基酸饥饿:
氨基酸饥饿开始阶段如果细胞洗涤不充分,将降低细胞均匀同步的程度。要使用透析过的FBS,这非常重要的。 在氨基酸饥饿期间,保持适当数量的细胞很重要。氨基酸饥饿如果出现同步细胞数量过少,有可能是由于垂死的细胞提供了异亮氨酸。

5、洛伐他汀:
在洛伐他汀存在下,只有几种成纤维细胞系显示出强烈的G1期阻滞特征,而其他肿瘤细胞系在G1和G2中均表现出持续停滞。
如果你发现洛伐他汀使你的细胞株出现显著的G2而非G1阻滞,而你需要G1期阻滞,那么最好选择另一种同步方法。

6、含羞草素:
含羞草素引起周期阻滞的准确位置和作用机制目前尚不清楚,有学者发现含羞草素可抑制细胞进入S期或抑制细胞进入S期(Kalejta和Hamlin,1997)。 因此,可使用含羞草素作为G0/G1同步方案的辅助手段,以获得纯的晚期G1/S同步培养物。

7、双胸苷阻滞:
时间是这项技术的关键! 如果胸苷添加得太快,则S期末的细胞将被捕获,直到第二个胸苷阻断后释放。 如果加入胸苷过晚,已经处于S期的细胞将在阻滞期间陷入S期,并可能干扰早期S期事件的检测。

怎么样,看了这么多要点还嫌不够?那么可以在论坛搜索“细胞周期”关键词,会有一大堆帖子和资料出来。直接点击下面的图标查看参考文献的原文PDF:
Click Here to Read Online

参考文献:https://doi.org/10.1002/0471143030.cb0803s00

最新评论

idealiyan 发表于 2018-11-24 15:02:15
关于细胞周期同步化的处理条件和作用时间,可以直接检索细胞名称和周期同步化  这方面的数据还是很多可以参考的
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