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OMIP-038:14色方案精细评估固有免疫细胞

发布者: niwanmao | 发布时间: 2018-11-13 16:03| 查看数: 270| 评论数: 0|帖子模式

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先天免疫系统指导着适应性免疫系统的反应。 因此,充分了解先天免疫反应,对疫苗开发和感染后保护性宿主免疫反应的预测至关重要。人体血液样本数量有限; 对于儿科样本尤其如此。 这些珍贵的样品需要更有效的多色分析,才能从最少的样品中提取尽可能多的信息。
为此,我们可以用14色方案,单管完成中性粒细胞、单核细胞及其亚群、DC及其亚群、γδT细胞等固有免疫细胞亚群的检测,并通过TLR刺激,量化检测其细胞因子反应。

方案组成
2018111301.png

分析和设门
设门挺简单,FSC/SSC选择白细胞之后,通过FVD排除死细胞(这里一般建议在前面增加一个排除粘连体的门):
2018111302.png

接着,通过CD66排除粒细胞:
2018111303.png

然后,依次选择HLA-DR+和HLA-DR-两群:
2018111304.png

HLA-DR+群里面的细胞种类比较杂,所以需通过CD14/CD16散点图,先将单核细胞三个亚群分出来(经典型单核CD14+CD16-、炎症性单核CD14+CD16+、巡逻型单核CD14dimCD16+):
2018111305.png

再将上图中CD14-CD16-的细胞,进一步通过CD123/CD11c分三群:CD123+的pDC、CD11c+的cDC、CD123-CD11c-的B细胞。不过B细胞不是我们需要的固有免疫细胞,只是顺便分析而已。这里,通过TLR7/8配体R848刺激可衡量cDC的功能:
2018111306.png

HLA-DR-群,通过CD3+圈中T细胞,再通过TCRγδ圈中γδT细胞,同样利用TLR7/8配体R848刺激衡量γδT细胞功能:
2018111307.png

还是很简单吧。如果觉得14色你们的机器做不了,可将其拆分开来,从HLA-DR那里开始分成两管。

参考文献:Smolen, K. K., Cai, B. and Kollmann, T. R. (2017), OMIP‐038: Innate immune assessment with a 14 color flow cytometry panel. Cytometry, 91: 966-968. doi:10.1002/cyto.a.23109

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