流式中文网 门户 查看主题

OMIP-039:检测和分析NKG2C+适应性NK细胞

发布者: niwanmao | 发布时间: 2018-11-21 16:50| 查看数: 180| 评论数: 0|帖子模式

亲爱的FLOWER,加入流式中文网,一起讨论,一起学习,享受更多福利吧!

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?加入流式中文网

x
众所周知,NK细胞是固有淋巴细胞(innate lymphoid cell,ILC)的一员,能够对恶性转化或病毒感染的细胞产生快速免疫反应,无需像T细胞等适应性免疫细胞那样进行事先“训练”。但现在逐渐地有证据表明,NK细胞也可以有免疫记忆功能,表现出适应性免疫细胞的特点,尤其是在病毒感染时(①Sun JC, et al. Adaptive immune features of natural killer cells. Nature 2009;457:557–561. ②Reeves RK, et al. Antigen‐specific NK cell memory in rhesus macaques. Nat Immunol 2015;16:927–932.)。

在一些NK基因缺陷患者受到病毒感染,尤其是人类巨细胞病毒(HCMV)等疱疹病毒感染时,NK细胞对抗病毒时的适应性特点表现得就特别明显。

与病毒特异性CD8+或CD4+ T细胞不同的是,并非所有人都能检测到HCMV特异性NK细胞,仅在30~40% HCMV血清学阳性的患者中能测的到。在这些病人中,活化受体NKG2C (CD159c)和KIR受体是“适应性NK细胞”的标记。

与经典NK细胞相关,适应性NK细胞有些表观学和功能上的变化,但并不是十分明确,目前大多用NKG2C+CD56dim作为适应性NK细胞的设门标准,但这还不够。

为此,Hammer Q等人设计了下面这个11色方案,来更好的区分适应性NK和经典NK:
抗体
荧光素
克隆号
目的
死活染料Aquadump标记,去除死细胞
CD14BV510M5E2dump标记,排除单核细胞
CD19BV510HIB19dump标记,排除B细胞
CD3PE‐Cy5UCHT1排除T细胞
CD56PE‐Dazzle594HCD56确定NK细胞
NKG2C (CD159c)PEREA205适应性NK细胞标记
NKG2A (CD159a)PE‐Vio770REA110经典NK细胞标记
NKp30 (CD337)eFluor450AF29–4D12经典NK细胞标记
Siglec‐7 (CD328)APC‐Vio770REA214经典NK细胞标记
ILT2 (CD85j)APCHP‐F1适应性NK细胞标记
CD57PurifiedTBO1适应性NK细胞标记
Mouse IgMBV605RMM‐1检测 CD57
CD2PerCP‐Cy5.5RPA‐2.10适应性NK细胞标记
CD7BV786M‐T701经典NK标记

首先通过死活染料、CD14、CD19同时去除死细胞、单核细胞、B细胞,继而排除粘连体,圈选淋巴细胞:
2018112102.jpg

对于NK细胞,圈选CD3-CD56dim部分,因为适应性NK细胞均在CD56dim,目前尚未有报告有CD56high,同时选了一群CD3-CD56-作为内对照。对于CD3-CD56dim的NK,根据,根据NKG2C,分为CD56dimNKG2C+和CD56dimNKG2C-两群:
2018112103.jpg

对上述的CD56dimNKG2C+(红色)和CD56dimNKG2C-(黑色)两群对比NKG2A、NKp30、Siglec-7、ILT2、CD57、CD2、CD7的表达情况,而灰色背景的就是前面说的用于内对照的CD3-CD56-细胞:
2018112104.jpg

用扇形图综合评估CD56dimNKG2C+和CD56dimNKG2C-两类细胞表面标记的共表达情况,可发现NKG2C+群体内,存在NKG2A– NKp30– Siglec‐7– ILT2+ CD57+ CD2+亚群,:
2018112105.jpg

整体看下来不复杂,最后的扇形图是用一个SPICE的软件生成的。经常对一些亚群进行深入的挖掘,可能能发现一些有意思的结果。

参考文献:Hammer Q, Romagnani C. OMIP-039: Detection and analysis of human adaptive NKG2C(+) natural killer cells. Cytometry A. 2017 Oct;91(10):997-1000. doi: 10.1002/cyto.a.23168. Epub 2017 Jul 17. PubMed PMID: 28715616.

最新评论

关闭

本站推荐上一条 /1 下一条

流式中文网    

联系我们: mail#flowcyto.cn (#改为@)

GMT+8, 2018-12-10 20:51

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.