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新时代,流式在成熟B细胞肿瘤诊断中究竟起着什么作用?

发布者: niwanmao | 发布时间: 2019-1-6 13:42| 查看数: 519| 评论数: 0|帖子模式

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随着其它诊断手段的纳入,以及新的治疗方案的出现,流式在成熟B细胞肿瘤诊断中的作用已会有所变化,看一下2018年底这篇综述讲些什么吧。

成熟B细胞肿瘤是一组异质性疾病,临床表现(可表现为白血病或淋巴瘤形式)、病理特征和结果差异很大,但它们都来源于B细胞系,具有克隆性,并且具有成熟B细胞的形态学、免疫表型和遗传特征。

流式细胞术已经成为成熟B细胞肿瘤的有力诊断工具,在评估外周血、骨髓、体液和组织活检样本中具有很强的实用性。然而,随着其他方式如分子检测被纳入淋巴肿瘤的诊断检查,以及新治疗方案的出现,流式的作用也发生了一定的变化,2018年12月Cytometry B杂志上的这篇综述详细讨论了流式在成熟B细胞淋巴肿瘤的诊断和亚分类、预后评估、治疗靶点的鉴定以及疾病对治疗反应的评估,让我们能够重新定位流式在新时代中的作用。

诊断和亚分类
流式在诊断B细胞肿瘤中的两个最基本的作用是:
(1)确定系列来源
通常采用CD19、CD20、CD22和CD79。
一般与SSC参数结合分析。
2019010701.png

(2)区分肿瘤和非肿瘤B细胞。
大多通过评估免疫球蛋白(Ig)轻链限制和异常抗原表达来鉴别。
反应性B细胞,一般轻链无限制性表达:
2019010702.png

肿瘤性B细胞轻链存在限制性,例如下面这例是lambda单型性表达:
2019010703.png

这例是CLL,kappa弱表达:
2019010704.png

下面这例是多克隆性高球蛋白血症,存在部分lambda和kappa共表达的B细胞:
2019010705.png

对于轻链限制性的问题,还得关注一些CD19强度减弱,又有正常B细胞掺杂的病例,很容易漏诊(下图中存在一类CD19弱表达、FSC增大的异常B细胞,呈lambda限制性表达,如果不单独圈出这群细胞,就容易漏掉):
2019010706.png

CLL/SLL常常会出现轻链弱表达或缺失。但需关注的是,正常B细胞也可以出现轻链缺失或下调,主要在以下几类细胞中:
体液
正常中期或早期B
生发中心B细胞
滤泡增生
至于亚分类,一般根据CD5、CD10这两个进行初步分类,然后再进行亚分类,该篇综述汇总出了下面这个表格,比较实用:
2019010707.png

不过我们之前发过三篇详细讲解的帖子,可能比这个表更实用:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5033-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5036-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5040-1-1.html

流式与靶点确定、治疗决策
除了协助成熟B细胞淋巴肿瘤的诊断和分类外,流式细胞免疫表型分析在免疫治疗靶点的检测中发挥着重要作用。潜在的治疗选择包括针对B细胞相关抗原CD20,CD22和CD79的单克隆抗体、抗体药物偶联物(ADC,如抗CD22和抗CD79b ADC微管破坏剂monomethyl auristatin E (MMAE)、CD19 CAR-T细胞。
通过流式细胞术测量抗原靶标的密度,预测单克隆抗体疗法的反应。

在治疗之后,流式可以通过MRD检测,了解治疗效果。但在目前这些靶向治疗之后,MRD需要关注的是靶分子的表达改变,例如下图这例CLL患者,在CD19 CAR-T细胞治疗前,CD19表达良好(下图A、B),但在治疗之后,就变成C-F图那样,CD19转阴,但其它标记与初发类似,因为在做MRD设门时特别要小心:
2019010711.png

这类问题的对策,我们之前在论坛上也发过两个帖子,请扫下面的二维码阅读:
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5662-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6712-1-1.html

观点
流式中文网认为,虽然随着基因分类的渗透,以及其它诊断手段(如PET等)出现,流式的诊断地位有一定的弱化,但流式有着其它诊断手段不一般的优势,一是快速,二是可以利用少量样本即可诊断(例如脑脊液、穿刺样本等,在这里友情提醒一下使用保存液能够得到更好的结果,见文末动图),三是对靶向治疗可行性的评估,四是对MRD的监测能力,即使是髓外样本,只要能穿的到就可以。
目前,流式诊断B细胞肿瘤的弱点在于非典型表型淋巴瘤亚型的确诊上,此时可能只能结合病理和基因结果,但是,我们不能把流式作为一种孤立的技术,如果我们把流式分选和单细胞测序结合起来,实现的诊断是不是就能更精准了呢?

最后,再附上一篇曾经的热帖《B细胞分化与淋巴瘤》,是病理大牛的讲话内容,但对流式诊断淋巴瘤非常有用,可能很多人看到过,但对于新入门的FLOWER,是不可多得的好材料:
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4828-1-1.html

参考文献:Seegmiller AC, Hsi ED, Craig FE. The current role of clinical flow cytometry in the evaluation of mature B-cell neoplasms. Cytometry B Clin Cytom. 2018 Dec 13. doi: 10.1002/cyto.b.21756.


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