JC-1检测线粒体膜电位

宋漂亮

请求各位老师帮忙。我最近在做jc-1线粒体膜电位，细胞比较特殊，是真菌细胞。真菌细胞刺激后加jc-1染色，然后直接上流式。正常的真菌细胞跑出来的图和文献里看到的差不多，但是刺激以后发生凋亡和坏死的细胞会发生粘连，在右边出现了高红高绿的细胞团（其他文献中没见过），刺激越重，粘连越严重，右面的一团细胞越大。第一个图是正常细胞，第二个图是处理比较严重的，两个图电压不一样。我想请问：像这种粘连的情况，可以通过门里面细胞的比例来分析膜电位变化情况吗？还是通过红绿荧光强度比值来计算比较合适？因为太特殊了做流式的老师也说我这个不知道该怎么办

sunny2829

如果粘连比较严重的话，可以用A/H，或A/W去除粘连体，在进行分析。

niwanmao

按照下图设门。

宋漂亮

sunny2829 发表于 2019-1-17 09:53
如果粘连比较严重的话，可以用A/H，或A/W去除粘连体，在进行分析。

不好意思因为做流式也没多久，很多东西不是特别懂，请问您说的 A/H或A/W  指的是什么呢？

宋漂亮

niwanmao 发表于 2019-1-17 10:55
按照下图设门。

您的意思是，我这个流式跑成这样基本是正常的是吗？主要是设门的问题吗？

宋漂亮

niwanmao 发表于 2019-1-17 10:55
按照下图设门。

还有我这个变化趋势的话，其实并不是往右下的，是偏右甚至有点偏右上，请问这是我实验的问题还是流式参数设置的问题呢？

niwanmao

宋漂亮 发表于 2019-1-17 11:23
还有我这个变化趋势的话，其实并不是往右下的，是偏右甚至有点偏右上，请问这是我实验的问题还是流式参数 ...

估计你补偿没调

宋漂亮

sunny2829 发表于 2019-1-17 09:53
如果粘连比较严重的话，可以用A/H，或A/W去除粘连体，在进行分析。

感谢感谢！我查了一下基本上明白了。A/W组合选W比较小的，A/H组合选对角线位置的，从而选出单细胞。您看是这样吗？

还有就是，其实我并不能确定右边那团细胞一定是粘连，只是我的真菌受到损伤时确实有这样一个特征，再者右上方这个位置应该是同时具备高红高绿的特点，所以我猜测可能是粘连细胞红色绿色都比较强造成的。以您的经验来看，除了粘连，那一团细胞还有别的可以解释的原因吗？

宋漂亮

niwanmao 发表于 2019-1-17 13:41
估计你补偿没调

以您的经验来看，我这个图还有什么其他需要注意的问题吗？包括调电压，或是我的样本处理？我今天晚上打算重新做一次，有问题请您指教，我积极改正！
我一直以为右边这一团是粘连的问题，照您圈门的方式来看，感觉就是往右下偏的那种正常的典型的现象，您是觉得在粘连这方面没有多大问题是吗？