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绝对计数,微球法好还是体积法好?

发布者: niwanmao | 发布时间: 2019-2-28 22:45| 查看数: 166| 评论数: 0|帖子模式

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以前已证明,单平台法好,那么单平台绝对计数方法中,有微球法和后来不少厂家力推的体积法,究竟哪个更好呢?
2019年2月份的英国、美国、意大利、中国等七国协作研究给了我们一个结论:两种方法无统计学差异,但是两种方法均存在一定的风险和变异概率。

下面稍微回顾一下该项研究过程:
七个国家12家参与者,每家均给予6管CD34+绝对计数质控品和6根同批次Trucount管,3管质控品用0.5ml水重悬作为高值参照,3管用1.5ml水重悬作为低值参照。

各家单位中,用体积法绝对计数的机器有:
2台BD FACSVerse™、1台CyFlow Cube 8、2台CyFlow ML 、1台optical reference flow cytometer (PhysikalischTechnische Bundesanstalt, Germany,这家公司没听说过)、2台Attune、1台BD Accuri™。

设门方法采用ISHAGE方案,具体的设门参见我们之前的论坛帖《ISHAGE方案:我们都做对了吗?》(http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2765-1-1.html)。

结果如下表和下图,低值和高值相关系数在0.93和0.99:
屏幕快照 2019-02-28 下午10.18.15.png 屏幕快照 2019-02-28 下午10.20.48.png

但是,从图中低值数据部分,可以看到3个数据明显偏移(灰色三角形点),考虑可能体积法吸入的体积过大,导致结果偏低。因此,体积法的主要风险是流式细胞仪中执行定量吸入器具的准确性,因此,需要参考移液器等计量工具一样,能够有标准化的定期校准规范。
至于微球法,存在的风险主要有:
(1)微球未混合均匀,或获取低值样本时时间长导致局部微球浓度变化,这可以通过Time参数图看微球和细胞的比例变化了解;
(2)微球吸附在管壁上导致丢失,这可以通过加入0.5~1%白蛋白防止。
(3)操作员阈值设置错误,导致微球丢失。

总体来说,两种方法一致性好,但需要规范和标准。

参考文献:Saraiva L, Wang L, Kammel M, et al. Comparison of Volumetric and Bead-Based Counting of CD34 Cells by Single-Platform Flow Cytometry. Cytometry B Clin Cytom. 2019 Feb 20. doi: 10.1002/cyto.b.21773.

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