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做细胞因子定量检测的FLOWER注意抗凝剂和温度,会影响结果

发布者: niwanmao | 发布时间: 2019-6-25 16:12| 查看数: 123| 评论数: 0|帖子模式

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做细胞因子定量检测的FLOWER注意抗凝剂和温度,会影响结果

定量检测游离细胞因子,科研或临床中既有用血清,也有用血浆,既有用EDTA抗凝,也有用肝素抗凝,既有室温保存,也有4度保存或-20度保存。究竟什么样的条件最好呢?

挪威的Linda Torrissen Hennø等人2017年发表的一篇《Effect of the anticoagulant, storage time and temperature of blood samples on the concentrations of 27 multiplex assayed cytokines – Consequences for defining reference values in healthy humans》文章较好的给我们展示了不同条件的影响。

采样条件
采样条件极大地影响细胞因子水平。通常,与血浆相比,血清收集管采集的血清样本细胞因子相对较高,原因由于凝血过程和凝血酶活化增加了细胞因子的释放。 血浆样本在离心和分离后,细胞因子水平就能保持稳定。相反,如果不分离,全血样品容易导致许多细胞因子升高,尤其是室温保存更明显,这与细胞在体外释放细胞因子有关。 从保存在碎冰上的EDTA抗凝全血中获得的血浆(<1小时),细胞因子水平最低。 20190625_150058.png 20190625_150122.png

温度
在抗凝全血中,即使在EDTA存在下,当样品在室温下储存时,许多细胞因子的水平也会增加。 这些结果可能是由于白细胞体外合成或释放预合成的细胞因子,但可以通过低温保存预防。 有趣的是,如果该样本中加入特异性抑制凝血酶活性的lepirudin,仅观察到PDGF-BB、IL-6、IL-8和IL-13的少量增加,表明凝血酶参与这些细胞因子的释放。 血浆分离后,细胞因子相对稳定,尽管也会受到时间和温度的一定影响。 在室温下储存长达24小时导致少数细胞因子减少或增加,减少可能与血浆中某些细胞因子的稳定性较低、蛋白酶降解或细胞因子与其各自可溶性细胞受体的结合有关。 但在4℃下,EDTA血浆中储存长达4小时没有细胞因子发生变化。

抗凝剂
应避免使用肝素抗凝,因为有些细胞因子,特别是CCL4(MIP-1β)和CCL2(MCP-1)的水平会升高,原因仍有待阐明,但推测可能是由于肝素会激活全血中的单核细胞释放细胞因子。 因此,在可用的抗凝血剂中,EDTA是细胞因子优选的抗凝血剂。

综合上面三个条件的影响,我们建议采用EDTA抗凝全血收集细胞因子样本,收集后将全血样品置于冰上(0°C)并立即离心,如无法立即离心,建议4°C条件下最多保存4小时必须得离心分离出血浆。分离出以后,尽量储存在-80°C。以后最多可以将血浆冻融三次。

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