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OMIP-059:鉴定小鼠造血干细胞和祖细胞

发布者: niwanmao | 发布时间: 2019-8-14 14:31| 查看数: 175| 评论数: 0|帖子模式

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《单管16参数方案同时检测CD45.1/2和可控绿色荧光蛋白表达鉴定小鼠造血干细胞和祖细胞》

HSC(造血干细胞)位于造血系统分化的顶端,需要一组不同的细胞表面标志物来表征。随着表面标志物的数量增加,可以分出越来越多的干祖细胞亚群。然而,优化的多色免疫表型方案(OMIP)都没有报道。 德国的Marcus Eich等人在2019年7月7日的Cytometry A上发表了一篇《OMIP-059: Identification of Mouse Hematopoietic Stem and Progenitor Cells with Simultaneous Detection of CD45.1/2 and Controllable Green Fluorescent Protein Expression by a Single Staining Panel.》,采用16个抗体(含CD45.1、CD45.2)+可诱导的GFP,区分小鼠骨髓中的HSP、MPP和定向祖细胞。

CD45.1和CD45.2这两个等位基因相差5个氨基酸,并且通常用于HSC移植实验以区分宿主和移植细胞及其子代细胞。 在许多不同的应用中,细胞内报告蛋白GFP及其衍生物增强型GFP(EGFP)常用于标记细胞。

Protocol中,采用了两种小鼠品系。 首先,SCL-tTA H2B-GFP转基因小鼠可表达CD45.1, 这些小鼠在HSC-骨髓祖细胞特异性SCL启动子下表达H2B-GFP融合蛋白,这些蛋白可在强力霉素存在下被四环素响应调节因子抑制。 其次,ISRE-EGFP转基因小鼠可表达CD45.2和EGFP,由干扰素反应因子控制。 染色样本采用动物股骨、胫骨和脊柱分离出来的骨髓。

方案
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结果
设门分析如下,相关解释见图上标注,如需更详细的讨论,访问原文《OMIP-059: Identification of Mouse Hematopoietic Stem and Progenitor Cells with Simultaneous Detection of CD45.1/2 and Controllable Green Fluorescent Protein Expression by a Single Staining Panel.
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