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一个肺泡灌洗液样本的处理和上机结果

发布者: niwanmao | 发布时间: 2019-9-17 16:05| 查看数: 196| 评论数: 7|帖子模式

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肺泡灌洗液是呼吸科疾病非常重要的样本类型,与血液科疾病需要骨髓一样不可或缺,但由于灌洗后存在絮状物,疑与气管内粘液有关,给处理带来不少麻烦。 通常,很多文章会建议用DTT预处理后,再用纱布过滤,但是DTT这个东西我曾经用全血样本做过几个浓度梯度的测试,发现浓度稍微高一些就容易使血样变黑,因此不排除对结果会有影响(尽管没有明确的对比)。 因此,8月31日呼吸科医生送来的肺泡灌洗液样本,我毫不犹豫地采用了魔滤®(Magic Filter®)+魔杵®(Magic Vajra)组合进行机械解离。 观察肺泡灌洗液,一共约5ml,大部分澄清,中间悬浮着白色絮状物,我们需要的细胞就是液体和絮状物中,因此,必须将絮状物机械解离成单细胞。我们将样本轻轻混匀,然后用1ml枪头吸取1ml样本注入置于流式管上的魔滤中,很快,其中的澄清液体通过魔滤底部的滤网滤入流式管,絮状物留在魔滤滤网上,用镊子将其挪至侧壁,用魔杵迅速研磨数下,接着用含BSA的PBS冲洗一下,对着光一看,魔滤侧壁和底部的絮状物完全消失,这是否意味着细胞解离成功,并且细胞完整性保持良好?

不急,先离心浓缩吧,500×g离心去上清,以200ul含BSA的PBS重悬,记录浓缩比例(浓缩5倍),接着染色上机吧。由于患者诊断上怀疑过敏性肺泡炎,所以临床上需要了解其淋巴亚群组成,通过T、B、NK比例及数量了解肺泡局部的免疫环境,从而推测病因,所以咱们就做个简单的淋巴亚群7项吧。 因为没有红细胞所以无需裂解,20分钟后加入绝对计数微球,混匀,上机一看,好家伙,漂亮,分群好,与临床诊断符合:
20190906.png

这次虽然是第一例用魔滤+魔杵处理的肺泡灌洗液,但是这个结果给了我们充分的信心,我们能够非常好地利用魔滤+魔杵套装保证处理后的单细胞悬液质量。后续,我们会继续肺泡灌洗液的免疫细胞组成的探索,给呼吸科疾病的免疫微环境检测带来有力解读。
当然,处理这类样本的方法还有很多种,例如你也可以用针筒底在滤网上直接磨,或者用其它粘液处理试剂处理,此处仅分享我们的经验,仅供参考。

最新评论

tiger 发表于 2019-9-17 16:27:28
请问阈值是设在CD45上吗?
niwanmao 发表于 2019-9-17 19:13:13
tiger 发表于 2019-9-17 16:27
请问阈值是设在CD45上吗?

阈值是FSC
tiger 发表于 2019-9-18 08:46:11

样品处理超棒,杂细胞很少。
疯疯道人 发表于 2019-9-18 13:06:03
请问老师小鼠肺组织的淋巴亚群7项有办法做吗?
niwanmao 发表于 2019-9-18 13:42:48
疯疯道人 发表于 2019-9-18 13:06
请问老师小鼠肺组织的淋巴亚群7项有办法做吗?

肺组织可以先按照上述的机械法看看,但是多数情况下得率会偏少。我个人的建议是先用胶原酶短时间消化后再进行机械研磨,既可避免酶消化影响抗原表达,又可增加得率。
疯疯道人 发表于 2019-9-18 13:55:19
niwanmao 发表于 2019-9-18 13:42
肺组织可以先按照上述的机械法看看,但是多数情况下得率会偏少。我个人的建议是先用胶原酶短时间消化后再 ...

好,非常感谢老师
lch198118 发表于 2019-9-18 16:20:50
老师,您好!请问你所用的魔滤和魔杵是什么?国内有销售的吗?

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GMT+8, 2019-10-18 11:34

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