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如何减少样本中的粘连体?

发布者: niwanmao | 发布时间: 2019-9-19 12:16| 查看数: 239| 评论数: 0|帖子模式

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粘连体的概念,以及如何在分析时排除粘连体,我们在既往做过总结:
但是,如果粘连体太多,即使我们排除掉,对实验结果影响还是很大的,而且对仪器管路也不利。所以,预防粘连体,才是上上之策。这里概括一些细胞粘连的常见原因和对策,希望给大家的实验样本制备带来帮助。

为什么单细胞如此重要?
  • 粘连体不能用于分析或分选,因为无法确定每个荧光标记的真实状态。 粘连体的存在意味着可用于分析或分选的细胞更少了。
  • 粘连体会导致通过仪器的流动不稳定,导致荧光强度测量异常。
  • 较大粘连体可能会堵塞仪器。
  • 仪器中粘连体越多,越容易导致样本获取速度变慢,使获取时间延长。


粘连的常见原因和对策需要根据粘连的原因,采取相应的对策。
1、由细胞间粘附造成的 这种原因通常依赖于阳离子,所以可以采取以下方法应对:
  • 收获贴壁细胞时,用大豆胰蛋白酶抑制剂(Soybean Trypsin Inhibitor)代替培养基/血清淬灭胰蛋白酶。
  • 使用不含二价阳离子的缓冲液(不含钙,不含镁)。
  • 尝试使用BSA代替血清作为缓冲液的蛋白质成分。 然而,并非所有细胞都能与BSA兼容,因此在开始大型实验之前需事先测试一下。
  • 如果细胞不兼容BSA,请使用已除去钙和镁的透析血清。
  • 向样品中加入EDTA(1-5mM)。 但并非所有细胞都能耐受EDTA,因此在开始大型实验之前需事先测试此方法。


2、由细胞死亡引起的 这种原因通常是因为裂解细胞释放的DNA,粘稠的DNA使得细胞更容易粘连。因此对策如下:
  • 用含100μg/mL DNAse I、5mM MgCl2的HBSS溶液处理细胞,室温15-30分钟。
  • 用含5mM MgCl2的HBSS洗涤细胞一次。
  • 将细胞重悬于含有1-5mM MgCl2和25-50ug/mL DNAse I的HBSS中。


参考文献:
https://www.bdbiosciences.com/do ... ng_TechBulletin.pdf
http://www.rockefeller.edu/fcrc/tips/sampleprep
http://expertcytometry.com/how-c ... sorting-experiment/

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