倪老师,抗体克隆选择在哪里检索比较靠谱啊?还有在染色中不同染色体系(PBS或者破膜液等),荧光素的选择上有什么讲究吗?还有自己的一个小问题,表染后固定和固定后表染会对结果产生什么影响呢? |
112358answer 发表于 2019-9-25 16:31 1、抗体克隆号的选择,一般都是参考文献里面的。 2、固定破膜,与表面染色,荧光素的选择上,目前没那么多讲究,曾经有说法说大分子荧光素很难进去,但实际染色貌似没这么多讲究。 3、我个人建议表面染色后再固定、破膜。先固定,会存在某些抗原位点构象可能被固定改变的风险。 |
niwanmao 发表于 2019-9-25 17:44 谢谢倪老师! |
倪老师,提个问题,一直有些困扰。做全血或者PBMC样品的检测的时候,死活细胞染料的界限真的不好区分,因为淋巴单核粒在本底上死活染料结合表达的效率好像就不一样,应该怎么处理? |
lxk47640 发表于 2019-9-29 15:31 这个问题与此帖的主题不一样吧。 我不知道你用什么死活染料,如果分不开,首先也需要滴定死活染料,跟抗体一样去找最佳用量;其次你得确保活细胞确实活力好。 |
感谢倪老师分享 |
倪老师,看了你提到的如果必须要用荧光渗漏比较大的组合,那么你得在这两个通道中尽量放互斥性表达的抗原。这里提到的互斥性表达的抗原是指什么?类似CD4和CD8这样的么? |
无知的牧羊人 发表于 2019-11-5 14:35 CD4和CD8还是有些T细胞共表达的。 互斥指的是一般不会同时表达在一个细胞上的,例如CD3和CD19,一个是T,一个是B,一般不会共表达。 |
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