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流式高通量多因子检测技术(原理同CBA)

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发表于 2012-5-25 11:05:21 | 显示全部楼层 |阅读模式

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这是eBioscience公司产品Flowcytomix,原理同BD CBA但是似乎操作更傻瓜更便捷。
如下是厂家技术材料:
基于流式细胞术的多指标高通量检测细胞因子方法—FlowCytomix Multiple Cytokine Detection System
可溶性蛋白质的定量和定性分析多采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹(Western Blotting)等方法,随着流式细胞术和固相化技术的发展和普及,采用流式细胞术同样可以对可溶性蛋白质进行定性和定量分析。
近些年,基于微球的多指标检测技术得到广泛的推广,与传统ELISA 技术只能检测一个指标相比,该技术能够实现从一份标本中同时检测多种指标,大大提高了科研人员的工作效率。其中代表技术是Luminex和BD CBAcytometric bead array system,CBA),但是由于Luminex技术必须用Luminex仪器进行检测和分析,而且该仪器价格昂贵,而CBA技术的检测也局限于BD公司流式细胞仪及相关软件,影响了该技术的推广和应用。
自2004年,eBioscience公司旗下Bendder Medsystem公司开发了一系列在流式细胞仪平台上进行多参数细胞因子或其它可溶性分子检测的技术——FlowCytomix技术,该技术克服了上述缺点,有利于多指标检测技术的应用和推广。
1. Flowcytomix技术原理
Flowcytomix基于微球的检测法原理与夹心法免疫测定相同。荧光聚苯乙烯微球被抗原特异的抗体包被。已包被了抗体的微球混合物与样本孵育。样本中的待检物(如细胞因子等)与微球上包被的抗体结合。然后加入生物素标记的抗体混合物,与结合于捕获抗体(微球)的待检物特异性结合。加入Streptavidin-PE,与生物素结合。用流式细胞仪根据微球大小和荧光标记强弱来区分微球群。2种大小的微球(4.4μm,5.5μm)内部分别标记 9、11种不同强度的荧光染料(远红荧光,可被氩、氦氖甚至紫外光源激发,发射波长690nm),构成了20种可以同时被流式细胞仪识别和区分的不同微球故可以同时在一份标本中进行多达20种指标的检测。
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2.  Flowcytomix技术优点
1) 检测指标多:可选择使用96 孔板或单个流试管,每个标本可同时检测20多个指标。
2) 可以自由组合检测指标:研究人员可以根据实验需要,自由组合检测指标,最多可同时检测20个指标。FlowCytomix试剂盒提供至少用于4 次标准曲线的试剂量,满足随时检测的需要,去除了标准品对标本数量的限制。
3) 操作简单便捷,节约成本:研究人员可根据条件选择使用96 孔滤膜板(试剂盒提供)或者流式管进行操作,一次实验可得到多个指标的结果,整个流程只需要3.5小时,极大的节约了人力、物力和时间成本。
4) 需要标本量少:突破传统的ELISA对标本需要量大的要求,FlowCytomix仅仅25ul的标本就可满足检测多个指标的要求。大大节省标本,尤其适用于珍贵标本的检测。
5) 适用标本范围广:FlowCytomix 适用于血清、血浆、全血、细胞培养上清和其它体液。
6) 同样的灵敏度,更宽的检测范围: 在保证等同于(或强于)传统ELISA的灵敏度的同时,FlowCytomix将检测范围扩大到了13.7-20000pg/ml,最大程度的保证了所有标本的适用性。
7) 免费脱机分析软件,分析处理数据便捷:FlowCytomix Pro软件可计算被测样本中待检物的浓度,它易用、省时,并且可以在PC机上对数据进行分析,软件可以免费下载。
Th1/Th2细胞因子Flowcytomix与传统ELISA灵敏度比较
Human Analyte
FlowCytomix(货号BMS810FF)
ELISA
IL-1β
5.2 pg/ml
0.3 pg/ml
IL-2
20.0 pg/ml
15.0 pg/ml
IL-4
15.7 pg/ml
2.0 pg/ml
IL-5
10.0 pg/ml
2.2 pg/ml
IL-6
0.8 pg/ml
1.4 pg/ml
IL-8
7.9 pg/ml
11.0 pg/ml
IL-10
1.5 pg/ml
2.0 pg/ml
IL-12p70
11.6 pg/ml
3.2 pg/ml
IFN-γ
2.2 pg/ml
1.5 pg/ml
TNF-α
17.5 pg/ml
5.0 pg/ml

4. 适用于所有流式细胞仪
Flowcytomix适用于BDCoulter及其他类型的流式细胞仪,使用仪器配套的常用软件(如BD CaliburCellQuest)采集数据。
5. 强大的软件分析功能,简单易行
免费提供适用于Windows系统的分析软件、友好的操作界面,使得您轻松获得实验结果。实验结果可以按标本分类、也可以按指标分类:可以PDF格式输出也可以Excel格式输出:完全根据您的选择来操作。
6.  FlowCytomix 产品形式:
1) Multiplex Kits——检测单样本中多个待检物(特定组合)所必需的试剂。
2) Simplex Kits——在流式细胞仪上检测某一特定待检物的试剂。几乎所有Simplex Kits都可能进行组合,可以同时检测多个因子,从而使得FlowCytomix Multiple Kits得以扩展。
Basic Kits——Simplex Kits所必需的配套试剂,并且也是每一个Comboplex Kit的组分。Comboplex Kits 包含有不同数量的Simplex Kits(可以选择)和一个Basic KitSimplex Kits必需)。

Flowcytomix 中文操作指南2-之流式细胞仪设定.pdf

429.42 KB, 下载次数: 94

Flowcytomix 介绍.pdf

747.96 KB, 下载次数: 90

Flowcytomix 中文操作指南.pdf

264.28 KB, 下载次数: 93

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2012-5-25 11:52:11 | 显示全部楼层
图片没传上来嘛。

成本如何?
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2012-6-19 11:43:42 | 显示全部楼层

图片附件中有,该试剂盒的成本较BD CBA便宜些,它的优点是有免费软件脱机分析,这对我们没有BD流式细胞仪的人来说方便极了。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2012-6-19 11:45:25 | 显示全部楼层
tree1004 发表于 2012-6-19 11:43
图片附件中有,该试剂盒的成本较BD CBA便宜些,它的优点是有免费软件脱机分析,这对我们没有BD流式细胞仪 ...

BD的CBA应该也不限机器吧?
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 楼主| 发表于 2012-6-19 11:49:33 | 显示全部楼层
CBA倒也没有仪器限制,只是数据的后期分析费事些。个人感觉,欢迎批评和指导。
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发表于 2013-1-11 12:40:15 | 显示全部楼层
那Flowcytomix这个测细胞因子需要设置复孔吗?还是一个标本只测一次。因为BD CBA 不用复孔。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2013-1-11 19:18:35 | 显示全部楼层
谢谢介绍,收藏了,待以后实验使用该技术。
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 楼主| 发表于 2013-2-26 09:57:15 | 显示全部楼层
yyflow 发表于 2013-1-11 12:40
那Flowcytomix这个测细胞因子需要设置复孔吗?还是一个标本只测一次。因为BD CBA 不用复孔。 ...

需要设置复孔,严格的说CBA也是需要设置复孔的。
两种技术在实验设计上没有什么差别。
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 楼主| 发表于 2013-2-26 09:58:12 | 显示全部楼层
wmingzhen 发表于 2013-1-11 19:18
谢谢介绍,收藏了,待以后实验使用该技术。

希望对您有帮助!
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2015-6-9 15:19:08 | 显示全部楼层
冻存差不多两个月的小鼠血清,做这个实验就有什么影响吗?测TNF-α,白介素-2、4、6、10的kit大概要多少钱呢?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
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