抗体滴定的重要性！

marshlin

好帖，关键是细胞液体积不9不要超过100微升！

david.yanqi

我老板说他在国外实验室做，染色体积一般都是50ul，抗体稀释10倍做的效果都差不多。。
不过我确实不知道抗体滴定这回事。。流式的水太深了。。

niwanmao

david.yanqi 发表于 2012-12-14 21:25:41

                               
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我老板说他在国外实验室做，染色体积一般都是50ul，抗体稀释10倍做的效果都差不多。。
不过我确实不知道抗

稀释10倍可能太过了，抗体浓度相差太大了。如果体积用50，那么抗体用量减少一半是可以的。

baolei0606

niwanmao 发表于 2012-8-8 09:26
总结一下，抗体使用时，如果有时间和条件，最好的方法是按照以上帖子中的链接描述的方法进行抗体滴定，找出 ...

老师，10的6次方细胞是指总细胞数还是目标细胞数？还有就是用全血的话，如何确定细胞数啊？

niwanmao

baolei0606 发表于 2014-5-22 20:33
老师，10的6次方细胞是指总细胞数还是目标细胞数？还有就是用全血的话，如何确定细胞数啊？ ...

指总细胞数，如果用全血，就是指有核细胞数，就是用红细胞裂解液裂完之后，计数镜下的有核细胞数量。

Kimbryant

niwanmao 发表于 2014-5-22 20:35
指总细胞数，如果用全血，就是指有核细胞数，就是用红细胞裂解液裂完之后，计数镜下的有核细胞数量。 ...

全血也要100 微升吗？这是eBioscience的表面抗体标记流程，是150微升的体系吗
1.  Aliquot 100 µL of whole blood to each tube.
2.  [Optional] Pre-incubate the cells with 20 μL of Human Fc Receptor Binding Inhibitor
Purified per 100 µL of blood for 10-20 minutes at 2-8
o
C or room temperature prior to
staining.
3.  Combine the recommended quantity of each primary antibody in an appropriate volume
of Flow Cytometry Staining Buffer so that the final volume of antibody mix is 50 µL. Add
to cells and pulse vortex gently to mix.  Incubate for 20-30 minutes at room temperature.
Protect from light.

Kimbryant

我要标记control 4 4,25 4,25,foxp3,如果每管都用100微升的血，每个抗体的量都是5微升，那每个的反应体系不是不一样了吗？control 是100微升,4,25,foxp3是115微升，还是要都加PBS把每管的体积变成150微升啊

niwanmao

Kimbryant 发表于 2014-6-19 07:29
我要标记control 4 4,25 4,25,foxp3,如果每管都用100微升的血，每个抗体的量都是5微升，那每个的反应体系不 ...

体积100还是150，在临床上感觉差异不大。

decade911

倪老师，我用c57小鼠的胫骨与股骨冲出的骨髓做抗体滴定，一分为二，最后在100微升体系（大概有1千万细胞）中做抗体滴定，以后也用这个体系做分析，请问这样可以吗？做干细胞的，细胞数要足够多。

niwanmao

decade911 发表于 2015-9-13 14:52
倪老师，我用c57小鼠的胫骨与股骨冲出的骨髓做抗体滴定，一分为二，最后在100微升体系（大概有1千万细胞） ...

做抗体滴定你用10E6细胞就够了。