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[标本处理] 向PBS加入无水乙醇会产生白色絮状沉淀是为什么呢

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发表于 2013-1-7 19:27:15 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
各位,想请教下,今天在做70%乙醇固定的时候,在向PBS中加入无水乙醇时,总是会产生白色的絮状物质,是什么原因呢?我是讲菌体混匀在300ul的PBS内,再缓慢加入700ul无水乙醇,分十次加的,每次加的时候都会震荡,是用的VOTEX的最小的频率震荡的,但是在加到约400ul的时候即会产生白色的絮状物质,这是之前都没有出现过的,实在是不太清楚是为什么。急求各位指教呀!!多谢呀·

发表于 2013-1-7 21:12:09 | 显示全部楼层
出现白色絮状物我看到过,一般都是细胞死亡的表现,因为细胞死亡后,其内的DNA和胞内蛋白被乙醇固定后就呈白色絮状物,去掉之后,细胞就很少。
细菌我想应该也差不多吧。
 楼主| 发表于 2013-1-7 21:15:47 | 显示全部楼层

去掉后基本就没有菌体离心出来了·我是取得对数期的菌体,应该是处于活性最强的呀·所以不是很明白,而且之前是同样的时间取出来的菌体,没有出现这种情况。不知道会不会有操作上的失误呢?我明天再换新的菌试试吧,谢谢老师了呀·
发表于 2013-1-7 21:39:38 | 显示全部楼层
zml 发表于 2013-1-7 21:15
去掉后基本就没有菌体离心出来了·我是取得对数期的菌体,应该是处于活性最强的呀·所以不是很明白,而且 ...

可以肯定的是细菌基本死光了,但什么原因还是需要排查的:究竟是细菌的问题还是试剂的问题。

我的建议:
菌体离心后,把上清去光,不要加PBS,然后直接加1-2ml 70%的乙醇,边滴边振荡。
 楼主| 发表于 2013-1-7 21:45:29 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-1-7 21:39
可以肯定的是细菌基本死光了,但什么原因还是需要排查的:究竟是细菌的问题还是试剂的问题。

我的建议: ...

好的,我明天试下再反馈结果,谢谢老师呀
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
我也是将上清去光,仅剩10ul的PBS水膜,直接遍震荡边加入酒精,任然有少许絮状漂浮物,是DNA还是没有散开的细胞?
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
blp 发表于 2018-12-3 00:40
我也是将上清去光,仅剩10ul的PBS水膜,直接遍震荡边加入酒精,任然有少许絮状漂浮物,是DNA还是没有散开的 ...

絮状的话,基本上可以排除掉细胞,粘粘的絮状物,往往是DNA
发表于 5 天前 | 显示全部楼层
倪老师,谢谢你的回答,刚刚开始流式,收集网上额的资料特请教:
1、乙醇固定有两种方法:A、用少许PBS重悬细胞后,按体积比直接加无水乙醇,最后配成70%-80%乙醇浓度,冰箱过夜;B、收集细胞后吸取上清,震荡滴入70%-80%乙醇溶液,冰箱过夜,请问到底哪种方法是正确的?
2、网上有说乙醇一定用PBS配,有的说用DD水配?那个是正确的
3、我是用B法固定,感觉滴入跟直接加入没啥区别,最后还得吹打才能成单个细胞?
谢谢!
发表于 5 天前 | 显示全部楼层
blp 发表于 2018-12-5 03:17
倪老师,谢谢你的回答,刚刚开始流式,收集网上额的资料特请教:
1、乙醇固定有两种方法:A、用少许PBS重悬 ...

用水配,用B方法
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
谢谢倪老师,我就是按B法,出现少许絮状物。因为我的细胞数目少,收集一次不容易,所以担心细胞死亡后数目更少,影响结果,我准备再double一次,再去上机。
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