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[结构和原理] 关于Hoechst33258和Hoechst33342的染色问题

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发表于 2013-1-23 15:43:38 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本帖最后由 a2782953 于 2013-1-23 16:34 编辑

最近需要做精子质量的检测,需要对精子进行染色后评估其viability,可是发现一个问题,关于Hoechst333258和Hoechst33342的。首先这两个染料根据百度及维基百科,以及碧云天公司的产品介绍中都说其是细胞膜通透性的。在我以前看到的几篇外文文献中用其来染细胞核用来标记全部细胞,如这片文章中用Hoechst33342来标记全部细胞:Protective effects of iodixanol during bovine  sperm cryopreservation,在这一篇文章中用Hoechst33258来标记死亡精子:Assessment of the effect of testosterone on the acrosome reaction of human spermatozoa,而在另外的文章中还有人说用Hoechst33258用来标记活细胞,如:温度和Hoechst 33258 浓度对人活精子标记效果的影响,这篇文章。另外根据我自己的实验结果,我发现我染小鼠精子的时候,Hoechst 33342和PI染色,Hoechst33342并没有像一些文章说的那样专门染活的精子,而是几乎全部精子全可以染。请教有经验的朋友解释下这两种染料是染活细胞的还是染死细胞的?如果其是染活细胞的,那么死细胞膜是不完整的,是不是他们也可以直接接触到细胞DNA然后也可以染上颜色呢?
    另外一个小问题:sybr-14是不是单买的话无法买到?只有在live/dead kit中才有呢?

发表于 2013-1-23 22:09:39 | 显示全部楼层
没做过这几种染料,只能帮你搜索一下了。

hoechst33342应该是染活精子的:http://books.google.com.hk/books ... p;ved=0CC8Q6AEwADgK

sybr14应该可以单买的,可以看看这篇全文是否提供了厂商名称:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22763236
 楼主| 发表于 2013-1-24 10:25:19 | 显示全部楼层
谢谢倪老师的对问题的回答,还是那么给力,都给出自己搜索的链接了,我再查一下!
发表于 2013-1-24 18:01:56 | 显示全部楼层

想起来,hoechst33342用在干细胞侧群分析上,就是利用干细胞对其外排的特性。所以我觉得活细胞和死细胞都可以染。来自: Android客户端
发表于 2013-1-24 21:46:33 | 显示全部楼层
我给别人做过hoechs33342染小鼠精子的分选。该同学同时染了PI去除死细胞,然后根据hoechst染倍体情况分选精子细胞。如果操作的好,其实死细胞很少的。
发表于 2013-1-24 22:18:53 | 显示全部楼层
gcz5340 发表于 2013-1-24 21:46
我给别人做过hoechs33342染小鼠精子的分选。该同学同时染了PI去除死细胞,然后根据hoechst染倍体情况分选精 ...

Hoechst33342死的精子会不会染上?
发表于 2013-1-27 13:28:40 | 显示全部楼层
特别找了个PI阳性比较多的,应该说死的还是可以染上的。
hoe.JPG
发表于 2014-9-16 22:25:09 | 显示全部楼层
gcz5340 发表于 2013-1-27 13:28
特别找了个PI阳性比较多的,应该说死的还是可以染上的。

请问 Hoechst的图为什么不是像PI测细胞周期那样的2个峰中间连一个平台的分布?
发表于 2014-9-17 17:46:42 | 显示全部楼层
是不是精子细胞都是单倍体啊,所以就一个主峰。其他体细胞有双倍体,有4倍体,还有中间的平台(2-4倍体之间的分裂状态)。
发表于 2014-9-17 20:48:09 | 显示全部楼层
椴树 发表于 2014-9-16 22:25
请问 Hoechst的图为什么不是像PI测细胞周期那样的2个峰中间连一个平台的分布? ...

两个峰中间是否有平台,跟细胞的S期比例多少有关,应该跟方法无关:)
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