关于LPS刺激脾脏PBMC后细胞大小变化的问题

david.yanqi

niwanmao 发表于 2013-4-17 10:27

                               
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我是这么考虑的，由于你是用CD19和CD40双标的，所以B细胞按道理应该两个标记均阳性，但是你所说的那堆比 ...

老师你再看看，那群SSC大的细胞群，也是有表达CD40的，只不过表达量不多。。。只有60%好像。。。。

niwanmao

david.yanqi 发表于 2013-4-17 10:43

                               
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老师你再看看，那群SSC大的细胞群，也是有表达CD40的，只不过表达量不多。。。只有60%好像。。。。 ...

我突然想起来，你用FSC-A/FSC-H做个散点图传上来给我看看。你说的这类细胞可能会不会是一些粘连体

david.yanqi

niwanmao 发表于 2013-4-17 10:54

                               
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我突然想起来，你用FSC-A/FSC-H做个散点图传上来给我看看。你说的这类细胞可能会不会是一些粘连体 ...

老师，在这。。请问这个怎么看？我是新手，不知道这是什么意思 ？谢啦。

niwanmao

david.yanqi 发表于 2013-4-17 11:03

                               
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老师，在这。。请问这个怎么看？我是新手，不知道这是什么意思 ？谢啦。
...

你按照如下蓝色线所画的方式设一个门，再看看FSC/SSC点图是不是发生了变化，你之前提到的那堆细胞应该有可能不见了或非常少。

设门

david.yanqi

niwanmao 发表于 2013-4-17 11:36

                               
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你按照如下蓝色线所画的方式设一个门，再看看FSC/SSC点图是不是发生了变化，你之前提到的那堆细胞应该有 ...

恩，真的没有了，老师，这有什么意义吗？我是做的脾脏全淋巴细胞。。

niwanmao

david.yanqi 发表于 2013-4-17 11:40

                               
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恩，真的没有了，老师，这有什么意义吗？我是做的脾脏全淋巴细胞。。

FSC-A/FSC-H点图的设门是为了排除细胞的粘连，现在流式的专业杂志都要求先进行这样的设门，可以排除因为粘连造成的非特异性信号，剩下的才是正确的目标细胞。

你可以看看我们站内的多色流式优化方案那个专辑的文章，全部都需要先进行FSC-A/FSC-H的设门：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... ion=view&ctid=6

david.yanqi

niwanmao 发表于 2013-4-17 11:56

                               
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FSC-A/FSC-H点图的设门是为了排除细胞的粘连，现在流式的专业杂志都要求先进行这样的设门，可以排除因为 ...

恩，我再仔细看一下，那这群细胞应该就是粘连了，分析时应该去掉。。谢谢老师

！

renping_jsnj

学习。谢谢。

renping_jsnj

查了一下，关于FSC-A vs FSC-H做图，是这样叙述的：
When single cells in the flow cell pass through the laser beam, their FSC-A and FSC-H signals correlate linearly and plot along a relatively straight line. Clumps of cells will have larger FSC-A signals relative to FSC-H, and the signals will fall off the diagonal formed by single cells.
还有一点，这是对于同一类细胞而言。
就楼主的图看，图中出现了两条相对明显的对角线，并且考虑到细胞经过LPS较长时间的刺激，所以我想是不是可以考虑这样的情况：gate1是一群single B cell，2是这类细胞形成粘连；3是刺激后产生的个头较大的一群single cell，4是这类细胞的粘连体。至于3的细胞类型，我想可能是B细胞刺激之后转换成的比如浆细胞。因为CD19作为一个pan B cell CD marker，广泛表达于各个时期的B细胞，包括浆细胞。
当然这些只是我看了FSC-A vs FSC-H 相关介绍后的一个猜测，提出来一起讨论一下，不知道大家怎么看。

renping_jsnj

更正一下，不是浆细胞，是成浆细胞plsmablast。