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[流式protocol] PMG系列2:细胞周期染色

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发表于 2013-12-11 19:53:37 | 显示全部楼层 |阅读模式

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BD Pharmingen 12项中文指南系列之二:细胞周期染色,该方法包括了PI染色和7-AAD染色两种方法。流式中文网自配试剂进行PI染色的详细步骤见:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-196-1-1.html(注:本系列中文指南为BD Pharmingen公司编译,故方法学中所用到的试剂均为Pharmingen的,如为使用其它公司试剂的,可在我们的protocol专版查找相关方法步骤)


2013-12-11_194459.gif


发表于 2014-4-25 21:14:28 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2014-4-1 13:24
应该用modfit,如下设置:G2:G1设置为1.6(因为你原来电压没调节好,G2和G1峰分离的不太好),另外设门如 ...

倪老师,帮我看一下今天做的结果,怎么拟合参数会达到20左右呢,其它的都还好。这样的结果影响倍性的判断吗?

2014.4.25.zip

1.1 MB, 下载次数: 18

倍体流式结果

 楼主| 发表于 2014-4-25 21:24:58 | 显示全部楼层
jordanping23 发表于 2014-4-25 21:14
倪老师,帮我看一下今天做的结果,怎么拟合参数会达到20左右呢,其它的都还好。这样的结果影响倍性的判断 ...

不知道你图中哪个峰是二倍体的G0/G1峰?如果没有已知倍体对照,很难确定倍性。
2014-04-25_212359.gif
发表于 2014-4-25 21:36:15 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2014-4-25 21:24
不知道你图中哪个峰是二倍体的G0/G1峰?如果没有已知倍体对照,很难确定倍性。

...

我这个里面没有加对照细胞,我是这么做的,对照细胞单独一管,样品也单独一管,最后分别根据道数的值来判断。比如对照是50,样品是75,则为三倍体。
 楼主| 发表于 2014-4-25 21:38:41 | 显示全部楼层
jordanping23 发表于 2014-4-25 21:36
我这个里面没有加对照细胞,我是这么做的,对照细胞单独一管,样品也单独一管,最后分别根据道数的值来判 ...

你这里面哪个二倍体对照细胞?
发表于 2014-4-25 21:44:07 | 显示全部楼层
jordanping23 发表于 2014-4-25 21:36
我这个里面没有加对照细胞,我是这么做的,对照细胞单独一管,样品也单独一管,最后分别根据道数的值来判 ...

看了您的设门,第一个gate需要圈这么多吗?我这么设门对不对?

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发表于 2014-4-25 21:47:27 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2014-4-25 21:38
你这里面哪个二倍体对照细胞?

001和002是对照细胞。3-6是样品。从结果上看,是不是可以判定3-6不是三倍体。是正常的二倍体。3-6的DNA含量比1和2稍大一点是正常的,大概为1.14倍。另外第1比第2大一点,可能是我细胞量不一样,第2管细胞量大,低速上机,都有1000多个/秒,所以结果可能不可信。
发表于 2014-4-25 21:49:57 | 显示全部楼层
jordanping23 发表于 2014-4-25 21:47
001和002是对照细胞。3-6是样品。从结果上看,是不是可以判定3-6不是三倍体。是正常的二倍体。3-6的DNA含 ...

还有一个信息是,我今天上机前没有过滤,会不会这个导致拟合的不好。
 楼主| 发表于 2014-4-25 22:06:53 | 显示全部楼层
jordanping23 发表于 2014-4-25 21:47
001和002是对照细胞。3-6是样品。从结果上看,是不是可以判定3-6不是三倍体。是正常的二倍体。3-6的DNA含 ...

从图形看,这些管子的图形都差不多,至于1.14这个数字可能是由于荧光漂移引起,你需要把二倍体细胞混在待测倍体标本中做一管,然后再单纯待测标本做一管,这样两管下来才可以确定待测标本的倍性。
发表于 2014-4-25 22:41:59 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2014-4-25 22:06
从图形看,这些管子的图形都差不多,至于1.14这个数字可能是由于荧光漂移引起,你需要把二倍体细胞混在待 ...

1.14是这样的:对照样品是甲(DNA含量是2.18pg),待测样品是杂交种,由甲(DNA2.18)和乙(DNA含量2.66pg)杂交,二倍体的杂交种一个是2.18/2+2.66/2=2.42pg,2.42/2.18=1.14。而我遇到的问题是,拟合效果比较差,是什么原因造成的?这样的数据可不可信?
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