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[流式protocol] PMG系列10:细胞内因子检测常见问题解答

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发表于 2013-12-26 20:20:00 | 显示全部楼层 |阅读模式

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这里介绍的是Pharmingen第10个系列:小鼠脾细胞/胸腺细胞BD Phosfl细胞内因子检测常见问题解答

主要涉及的问题有数十个,列出前15个,详见下方5张截图:
  • 在进行胞内因子染色时,BD FcBlock试剂有多重要?该如何应用?
  • 胞内细胞因子染色时,阻断步骤需要加入的重组细胞因子的量是多少?
  • 对于胞内因子染色的优化需要注意哪些?
  • 对于大鼠细胞的因子检测,有没有推荐的刺激方法?
  • 同时检测胞内因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和FoxP3时,是否有推荐的Buffer?
  • 抗小鼠IL-17抗体(clond TC11-18H10)识别A亚型还是F亚型?
  • 检测人IL-17A时需要用EL4细胞的哪种ATCC菌株?
  • 一步检测IL-17A和Tregs是否有推荐的试剂?
  • 是否可一步检测Th1/Th2/Th17分泌细胞?如果可以,有哪些推荐的试剂?
  • 如何在体外用人的PBMC得到Th9极化细胞?
  • 我想要用BD抗人GATA3抗体与IFN-γ和IL-4共染,推荐的buffer是什么?
  • 为什么胞内因子检测与ELISA之间相关性不好?
  • BD提供的三种不同的胞内因子检测试剂盒之间主要差异是什么?
  • BD Perm/Wash buffer中的沉淀是什么?会对结果产生影响吗?
  • 进行BD Cytofix/Cytoperm细胞因子染色步骤时,最佳的终止点是什么?


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发表于 2014-1-11 11:55:42 | 显示全部楼层
同时检测胞内因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和FoxP3时,是否有推荐的Buffer?

想问下各位老师,同时检测FoxP3和IL-4为什么尚未成功呢?我设计的实验是用FoxP3 Buffer同时测亚群的,是不是还得重新买IL-4的Buffer了?
 楼主| 发表于 2014-1-11 20:46:26 | 显示全部楼层
钢蛋儿 发表于 2014-1-11 11:55
同时检测胞内因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和FoxP3时,是否有推荐的Buffer?

想问下各位老师,同时检测FoxP3和 ...

光用foxP3破膜剂应该可以测胞内的。我们平时就用在MPO的检测上。
发表于 2014-1-19 10:18:24 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2014-1-11 20:46
光用foxP3破膜剂应该可以测胞内的。我们平时就用在MPO的检测上。

谢谢老师,这下我就放心了
发表于 2014-5-28 15:52:14 | 显示全部楼层
小鼠的PBMC和人血的差别大么?
 楼主| 发表于 2014-5-28 18:32:14 | 显示全部楼层
晓玮1991 发表于 2014-5-28 15:52
小鼠的PBMC和人血的差别大么?

刺激的条件上还是有区别的。
发表于 2014-5-29 10:12:10 | 显示全部楼层
看文献里讲3.3.2. PBMC (Standard Plates) (see Note 9)
1. Add 20 μL of 20 mM EDTA in PBS to each well, mixing by pipetting.
这个EDTA是什么作用呢?
 楼主| 发表于 2014-5-29 19:19:12 | 显示全部楼层
晓玮1991 发表于 2014-5-29 10:12
看文献里讲3.3.2. PBMC (Standard Plates) (see Note 9)
1. Add 20 μL of 20 mM EDTA in PBS to each well ...

文献全文放上来可能容易看的懂一些。
发表于 2016-9-26 11:40:54 | 显示全部楼层
老师有做过小鼠IFN-alpha的胞内染吗?我做了一段时间仍然失败,请问老师有什么建议吗?
 楼主| 发表于 2016-9-26 15:04:13 | 显示全部楼层
newbous 发表于 2016-9-26 11:40
老师有做过小鼠IFN-alpha的胞内染吗?我做了一段时间仍然失败,请问老师有什么建议吗? ...

1、用来刺激的试剂是否有效?刺激是否成功?
2、破膜剂是否有效?
3、胞内染色的抗体是否好?

需要逐步排除。你的结果图形有吗?
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