流式细胞术如何正确进行设门？

gogoyouyu

反设门有点没看懂，能再说详细点就好了

decade911

倪老师，
1.利用FMO怎么设置双阳性门啊？我的理解是一个FMO只能评价一个抗体的背景荧光，没法同时考查2个抗体的背景荧光啊，我要双阳性，是不是把门设得离背景远一些就好了。
类似下图这样：

2.反向设门后图如下图，这是怎么回事？为什么会有细胞跑到上级门的外面？这种结果可信吗？

望倪老师抽空解答。

niwanmao

decade911 发表于 2015-9-20 13:19
倪老师，
1.利用FMO怎么设置双阳性门啊？我的理解是一个FMO只能评价一个抗体的背景荧光，没法同时考查2个抗 ...

1、FMO主要是用来调节荧光渗漏的，可以设置相邻通道的marker。但如果你要设置双阳性，建议还是分别按照两个FMO对照依次设置marker位置。如果分群清楚，最简单，像你图示这种情况，分群还是可以，只是有点连接在一起，可以集中密度图或等高线图设。

2、反设门之后出现的这种分布，说明这类可能有部分是由于非特异性染色引起。你可以根据你要检测的细胞性质，进重新设置R2和R3。

decade911

niwanmao 发表于 2015-9-20 18:36
1、FMO主要是用来调节荧光渗漏的，可以设置相邻通道的marker。但如果你要设置双阳性，建议还是分别按照两 ...

1.我把门设得紧一点，是不是就没有必要设置FMO了啊？文献中那些直接在图上画双阳性的，是不是意味着他们没有做FMO？
2.还是不太理解。从最初的门一路画下了，里面的细胞应该是确定的，反向设门应该是最下级门内细胞一直在上级门内才对啊，和非特异性染色有关吗？
望不吝赐教。

niwanmao

decade911 发表于 2015-9-20 19:48
1.我把门设得紧一点，是不是就没有必要设置FMO了啊？文献中那些直接在图上画双阳性的，是不是意味着他们 ...

分群好的情况下，FMO是不需要，FMO对于那些阳性和阴性分不开的情况特别有用。文章中那些有没有做无法确定。

你的图形中是逐级设门设下来的，但显示上是否显示了全部，应该跟设的显示门有关。你用什么软件设？

decade911

niwanmao 发表于 2015-9-21 12:17
分群好的情况下，FMO是不需要，FMO对于那些阳性和阴性分不开的情况特别有用。文章中那些有没有做无法确定 ...

谢谢倪老师，
我用的是flowjo v10.0.7。
另外求解这个反向设门意义大不大啊？似乎做的人不多啊。
挺奇怪的，用不同级别的门（如R3或R2）去反向设门，结果还不一样，如下图：

niwanmao

decade911 发表于 2015-9-21 16:50
谢谢倪老师，
我用的是flowjo v10.0.7。
另外求解这个反向设门意义大不大啊？似乎做的人不多啊。

反设门最大的好处是帮助确定我前面那个门设置的位置对不对？帮助判断细胞来源。

huananlou101

谢谢~没用过双阳性还不是很懂。得多学习

fishswim1

倪老师，想请教一下，在什么情况下需要区分粘连体呢，还是说所有的实验都要做这个步骤？

niwanmao

fishswim1 发表于 2019-4-20 15:29
倪老师，想请教一下，在什么情况下需要区分粘连体呢，还是说所有的实验都要做这个步骤？ ...

所有的实验都需要。