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[流式protocol] 流式细胞术定量检测中性粒细胞吞噬功能

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发表于 2014-2-9 21:25:37 | 显示全部楼层 |阅读模式

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中性粒细胞有着不可思议的功能,可清除入侵体内的细菌、真菌等。这种作用主要是通过胞吞(即将目标内吞形成吞噬体,最后降解)实现的。因此,理解中性粒细胞如何与各种病原体相互作用,对不同刺激信号如何反应,均非常重要。本文是Methods Mol Biol. 2014的一个章节,介绍了通过流式细胞术检测中性粒细胞吞噬细菌功能的背景、具体方法步骤。
简言之,首先将细菌标记上荧光,在中性粒细胞吞噬之后,继续进行后续的标记,以区分粒细胞和残留在细胞外的细菌。
为了评估吞噬作用强弱,首先要确定一个中性粒细胞吞噬细菌的平均时间,然后用不同的细菌-中性粒细胞比例检测其功能。


由于流式细胞术很容易进行大批量、定量检测,故本方法可敏感、定量、快速地检测中性粒细胞吞噬功能,可重复性好。

实验流程:

实验流程

实验流程



实验结果分析示例:

实验结果分析示例

实验结果分析示例




全文下载:http://link.springer.com/protocol/10.1007%2F978-1-62703-845-4_18,亦或在此在线阅读
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发表于 2014-2-10 17:22:09 | 显示全部楼层
上一篇类似的文章,LZ贴的原文我再找找

流式结合台盼蓝、白念菌评估中性粒细胞吞噬功能.pdf

479.07 KB, 下载次数: 89

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 楼主| 发表于 2014-2-10 21:37:25 | 显示全部楼层
dragonhzqsmmu 发表于 2014-2-10 17:22
上一篇类似的文章,LZ贴的原文我再找找

感谢贺兄的分享。您的这篇是利用台盼蓝与内吞白念菌、粘附白念菌结合后呈现的颜色不同而鉴别PMN内吞效率的,这个方法还真是没看到过,不错不错。
我看到这篇链接在上面,你有权限吗?
发表于 2014-2-12 11:45:01 | 显示全部楼层
总算找到了

之前我贴的那篇文章,我仔细看了一下,好像是利用非穿膜染料诸如台盼蓝或者EB淬灭掉未被吞噬细菌表面标记的绿色荧光,转而变成红色,从而与被吞噬进细胞内保持绿色的荧光区别,这个方法我还是头一次看到,不知道有没有高手做过?

Quantitative Assessment of Neutrophil Phagocytosis.pdf

214.62 KB, 下载次数: 30

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发表于 2014-3-4 10:18:53 | 显示全部楼层
楼上说的这种方法我也在这篇文献里看到过,用的是台盼蓝,supplemental information里面有详细的方法说明。
但是我之前做这个实验还遇到另一个问题,我是用4度共孵育来作为control,按道理说中性粒细胞在4度条件下只发生细菌的粘附而没有吞噬行为。但是结果4度control组的阳性率也相当高,例如实验组阳性率60%时,control大约能达到40~50%,我想知道这样的情况正常么?我们用的细菌是一种内源表达GFP蛋白的菌株,所以没办法用台盼蓝去淬灭。

SI.pdf

1.89 MB, 下载次数: 27

Reactive oxygen species-induced actin glutathionylation controls actin dynamics .pdf

2.44 MB, 下载次数: 20

 楼主| 发表于 2014-3-4 13:05:16 | 显示全部楼层
流星杏子 发表于 2014-3-4 10:18
楼上说的这种方法我也在这篇文献里看到过,用的是台盼蓝,supplemental information里面有详细的方法说明。 ...

那么可以考虑用这里提到的第一种方法
发表于 2016-7-15 09:48:43 | 显示全部楼层
流星杏子 发表于 2014-3-4 10:18
楼上说的这种方法我也在这篇文献里看到过,用的是台盼蓝,supplemental information里面有详细的方法说明。 ...

您好,我想请教一下,标记大肠杆菌颗粒,文章中用的是Zymosan A and pHrodo,我想问问,只用其中一种可以吗?
 楼主| 发表于 2016-7-15 21:14:40 | 显示全部楼层
pyhua 发表于 2016-7-15 09:48
您好,我想请教一下,标记大肠杆菌颗粒,文章中用的是Zymosan A and pHrodo,我想问问,只用其中一种可以 ...

我没做过,搜了下,理论上一种够了吧
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