关于仪器计数时间的设置

wsnxbdr

我们的仪器是beckman的QUANTA，方法设置中有一项是选择计数的时间，比如选择10s开始计数，统计12s，意思是样品开始从激光点流过后的第10s统计细胞数目，连续统计12s后，用这12s的数据计数浓度，最后得到的点图也是这12s内的点的图。当然仪器也可以选择不用这种方式，但工程师推荐我们这么做，10s开始计12s也是工程师建议的。
我想问问大家，大家的仪器也是要这样设置吗，是的话一般用什么样的时间呢？
另外，当时工程师说这个时间段内的数据稳定有代表性，我很奇怪，这是为什么，难道液流中的细胞浓度在检测过程有明显变化吗？
我觉得都是来源于样品的，样品又是混匀的，应该每一秒流过的浓度都不会有太大差别吧。

最后，按前面说的设置，每走一个样花的时间应该是一样，实际操作中也基本一样，但只要检出的点特别少，走样的时间就会长很多，这是为什么？仪器好像有检测达到多少个点就停止的设置，但我设的数很高，应该都达不到的。

didi_zhou

wsnxbdr 发表于 2014-6-26 02:41
1.您说的这个机制我们的仪器有没有我真不清楚，我感觉没有，因为设置界面没看到跟这有关的，说明书也没提 ...

所有的仪器浓度检测应该都是有范围的嘛，比如10^3~10^7，纯水里面都没有颗粒，检测限低于最低检测值，仪器的软件设计可能会不能修正基线，收集时间长是正常的。

haven_t

用Time参数看看就清楚了吧。

wsnxbdr

haven_t 发表于 2014-6-25 11:59
用Time参数看看就清楚了吧。

请问您这句话什么意思，能再说的详细些吗

磊子-梦醒十分

按工程师推荐的方法计数应该更合理，因为在我用仪器计数时，前边计的数和后面计的数有差别，有时候差别很大，不知具体原因。

wsnxbdr

磊子-梦醒十分 发表于 2014-6-25 15:41
按工程师推荐的方法计数应该更合理，因为在我用仪器计数时，前边计的数和后面计的数有差别，有时候差别很大 ...

你所说有前面和后面是指？

niwanmao

wsnxbdr 发表于 2014-6-25 15:19
请问您这句话什么意思，能再说的详细些吗

@haven_t  指的是你将散点图横坐标设置为time，就可以看到每一秒的细胞数量变化，如下图，就说明各个时间点的细胞数量基本上是稳定的：

didi_zhou

样品进样有个样品压力与鞘液压力平衡的过程，前面几秒肯定是不稳定的所有的正压上样流式都一样，加压都是先压缩样品管或上样舱的气体然后再压缩液体，因为气体比液体更容易压缩。当上样一段时间以后这个压力平衡了才会比较稳定，这个时候计数才是准确的，不难理解。

另外你说的第二个问题，不是很清楚你的意思，是检测浓度的时间比较长还是检测样品的时间比较长。如果是检测时间的话要符合停止条件，包括获取时间、获取总颗粒数、获取某个门内的颗粒数，只要都有设定的话按先达到的停止，所以稀的样品（点少的）走的慢是正常的。如果是检测浓度的时间会变长的话应该是仪器内部有个矫正机制，会选取流量平稳的一段来计算浓度，这样对结果更有保证。如果浓度较高分散度较好的样品稳定性好采样时的CV就小，仪器获取时间就短。较稀或分散程度的样品一定时间内的通过速度不稳定，CV就比较大，仪器就会进行更长时间的采样保证结果稳定，这个机制我觉得蛮好。

wsnxbdr

didi_zhou 发表于 2014-6-26 00:07
样品进样有个样品压力与鞘液压力平衡的过程，前面几秒肯定是不稳定的所有的正压上样流式都一样，加压都是先 ...

1.您说的这个机制我们的仪器有没有我真不清楚，我感觉没有，因为设置界面没看到跟这有关的，说明书也没提到过。
2.我们仪器确实设置了一个很高的数值，达到这个数值便停止计数，但设的特别高，样品肯定达不到，所以仅从这个值来看，正常样品和空白样品（如纯水）的进样时间不应该有区别。
3.我们仪设置的是10s开始测连续测12s，我一直以为这两个数设好了就确定了，如果仪器还可以自己优化的话，那我设的这个数顶多就是个参考吧？我进样只进纯水，走样时间也会比较长，也可能是这个原因吗？
谢谢！

haven_t

wsnxbdr 发表于 2014-6-26 02:41
1.您说的这个机制我们的仪器有没有我真不清楚，我感觉没有，因为设置界面没看到跟这有关的，说明书也没提 ...

1 .稳定时间和样品的性状有关，特别是黏度，稳定时间肯定是需要的，据经验10s应该是足够的，一般样品5s即可，或者你可以通过time参数设门，圈出稳定的细胞进行分析。

2. 你说的是停止获取的条件吧，时间和细胞数其中一项满足设定就停止获取，如果设定了时间，但细胞浓度很低的话，会造成获取细胞数不足，影响分析结果。