CD4/CD25/FoxP3三色检测Treg结果示例

niwanmao

chenry 发表于 2016-6-1 19:16
老师，您好！您这个做的也是人的外周血跑出来的Treg的结果吗，和我的好相像？下面是我用milltenyi biotec  ...

你这个标本比例太低了，所以分群比较差。

chenry

niwanmao 发表于 2016-6-1 21:34
你这个标本比例太低了，所以分群比较差。

我老师跟我说我的主要问题是Foxp3没有染好，但是搞不懂为什么（他认为CD25+Foxp3+应该占10%左右）。实验是用BD calibur 做的，细胞总共收了十万。现在实验已经无法挽回了，老师您可以支几招的挽救措施吗？

niwanmao

chenry 发表于 2016-6-1 21:47
我老师跟我说我的主要问题是Foxp3没有染好，但是搞不懂为什么（他认为CD25+Foxp3+应该占10%左右）。实验 ...

你这个正常人标本？那确实不对。做完了没法挽救，只有重做。

chenry

niwanmao 发表于 2016-6-2 08:49
你这个正常人标本？那确实不对。做完了没法挽救，只有重做。

我这个标本是病人的

niwanmao

chenry 发表于 2016-6-2 10:38
我这个标本是病人的

病人的话你得大概了解他应该比正常人高或是低。如果真的低也不能说明肯定就错，关键是你得大概了解并且重复多次都是如此。

chenry

niwanmao 发表于 2016-6-2 11:38
病人的话你得大概了解他应该比正常人高或是低。如果真的低也不能说明肯定就错，关键是你得大概了解并且重 ...

这是做的正常人（左图）对照，比病人（右图）比例好像要多一点儿，重复实验，更改实验条件都是这个样子。总的来看，好像Treg 有那么一点点，但是不是特别多。

niwanmao

chenry 发表于 2016-6-15 16:00
这是做的正常人（左图）对照，比病人（右图）比例好像要多一点儿，重复实验，更改实验条件都是这个样子。 ...

图片愣是显示不出来，我还纳闷呢，看了下源代码，你把图片作为十六进制传上来，这是怎么传的呀，牛了。

现在将十六进制转换回去，发现坐标是黑的。不过对比看来，你的染色结果不太理想，没分好。

chenry

niwanmao 发表于 2016-6-16 15:25
图片愣是显示不出来，我还纳闷呢，看了下源代码，你把图片作为十六进制传上来，这是怎么传的呀，牛了。

...

奥，我是直接把图片粘贴到文本框里的，没有以附件的格式上传。横坐标是CD25， 纵坐标是Foxp3, 我现在直接怀疑是不是固定破膜剂出问题了。但是好像直接的PBMC和培养之后获得的Treg 跑出来的结果还是有区别的。

niwanmao

chenry 发表于 2016-6-16 19:51
奥，我是直接把图片粘贴到文本框里的，没有以附件的格式上传。横坐标是CD25， 纵坐标是Foxp3, 我现在直接 ...

这个结果差异并非真正的结果，如果我是Reviewer，我会觉得这个Treg比例有问题，分群根本没分开啊。

zhuangrui911

倪老师 您好！染Foxp3需要破细胞膜和细胞核膜，我们实验室负责流式的老师说，破膜后的细胞通过SSC与FSC圈门意义不大，因为细胞形态变了。是这样吗？谢谢！