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[流式protocol] 如何用福尔马林固定过的标本做细胞周期?

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发表于 2015-3-31 16:16:25 | 显示全部楼层 |阅读模式

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福尔马林是医院病理科用于固定组织标本最常用的防腐剂,能够长期很好地保持细胞形态,可是,它却对使用流式细胞术回顾性检测这类组织标本DNA产生极大的困扰。因为福尔马林使组蛋白产生交联,从而影响碘化丙碇(PI)或其它DNA染料与DNA的结合,使得所有峰左移并且无法分清。

1994年W. Roy Overton在Cytometry杂志上介绍了一个好方法,供大家参考。

他们测试了数种溶液、多个温度条件,最后发现
对于福尔马林固定过的标本,解离成单细胞后,用Dulbecco's PBS重悬,75℃作用1小时,然后再进行常规PI染色,能够获得最佳的恢复效果。


2015-03-31_154303.gif
图3福尔马林固定过的细胞株碘化丙碇染色荧光变化:选择了 T24、A673、SK-NEP-1三个细胞株,最上方一行代表新鲜细胞(未用福尔马林固定),作为正常周期对照,中间这行代表福尔马林固定过的细胞株,可见周期无法正常显示,最下方这行代表经过PBS 75℃加热1小时的标本,恢复近100%。


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Reversing. the Effect of Formalin on the Binding of u Propidium Iodide to DNA.pdf (583.77 KB, 下载次数: 9, 售价: 1 流星)
发表于 2015-3-31 22:19:25 | 显示全部楼层
感谢,非常合适我
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