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[标本处理] 关于流式测中性粒细胞CXCR4

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发表于 2015-4-12 13:24:35 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
大家好,我想用流式测定人血中性粒细胞表面CXCR4的表达情况,不知道中性粒细胞表面标记选用哪些呢???有咨询过老师,她说用CD45和CD11b,但是CD11b不止分布在粒细胞,单核细胞也有分布,而且我是先用物理分离法先提中性粒细胞,用CD45是否是必须的?我在想可不可以不用CD45,而用CD11b和CD15,这样的话加上同型对照,就得买6种抗体咯,求各位大神指导,有没有最佳标记的方法啊,万分感激!!!!

发表于 2015-4-12 14:10:00 | 显示全部楼层
在临床上,其实用CD45/SSC散点图就能把粒细胞圈出来。
 楼主| 发表于 2015-4-12 15:18:56 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-4-12 14:10
在临床上,其实用CD45/SSC散点图就能把粒细胞圈出来。

哦哦,具体的步骤是怎样啊?才进实验室,实在是有太多不懂地方,多多指教
 楼主| 发表于 2015-4-12 20:58:56 | 显示全部楼层
老师,我看到也有用FCS/SSC来鉴定中性粒细胞的,参考文献:Human neutrophils were identified by their characteristic forward/ side scatter (FCS/SSC) and/or CD16-positive staining.
Neutrophils were preincubated with human serum for 15 min and then stained with anti-CXCR4-PE (50 g/ml) or a PE-labeled isotype matched control mAb and anti-CD16-FITC (3.33 g/ml) for 20 min.
【Chemokines Acting via CXCR2 and CXCR4 Control the Release of Neutrophils from the Bone Marrow and Their Return following Senescence】
请问这个方法可靠吗?
 楼主| 发表于 2015-4-12 21:00:52 | 显示全部楼层
我看到有用FCS/SSC来圈中性粒细胞的,
Human neutrophils were identified by their characteristic forward/ side scatter (FCS/SSC) and/or CD16-positive staining. 【Chemokines Acting via CXCR2 and CXCR4 Control the Release of Neutrophils from the Bone Marrow and Their Return following Senescence】
不知道这种方法可靠吗?
发表于 2015-4-13 08:16:44 | 显示全部楼层
可爱朱古力tutu 发表于 2015-4-12 20:58
老师,我看到也有用FCS/SSC来鉴定中性粒细胞的,参考文献:Human neutrophils were identified by their ch ...

光用FSC/SSC当然也是可以的,设门如下:
2015-04-13_081544.gif


如果用CD45/SSC设门,设门如下:
2015-04-13_081554.gif


 楼主| 发表于 2015-4-13 08:20:00 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-4-13 08:16
光用FSC/SSC当然也是可以的,设门如下:

哪种方法更可靠呢?精确度更高呢
发表于 2015-4-13 08:30:07 | 显示全部楼层
可爱朱古力tutu 发表于 2015-4-13 08:20
哪种方法更可靠呢?精确度更高呢

粒细胞分群清楚,两种方法差不多。
 楼主| 发表于 2015-4-13 08:44:36 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2015-4-13 08:30
粒细胞分群清楚,两种方法差不多。

那还需要进一步标记中性粒细胞吗?如用CD15或者CD11b或CD16。
发表于 2015-4-13 09:12:55 | 显示全部楼层
可爱朱古力tutu 发表于 2015-4-13 08:44
那还需要进一步标记中性粒细胞吗?如用CD15或者CD11b或CD16。

中性粒细胞已经圈出来了,而且分群这么清楚,为什么还需要这些标记?
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