找回密码
 加入流式中文网

QQ登录

只需一步,快速开始

楼主: niwanmao

实例告诉您,为什么抗体滴定这么重要?

  [复制链接]
发表于 2017-2-23 21:43:51 | 显示全部楼层
想请问一下,一楼的例子滴定结果应该是1/4推荐用量能够能更好的区分阴性和阳性峰,在这两种抗体用量的流式图中,阴性峰的位置没有发生明显移动,但是推荐用量的阳性峰较1/4推荐用量的要偏左。我在实验中也遇到这个问题,当抗体用量增加时阳性峰明显左移,请问是什么原因造成的这个现象呢?
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2017-2-23 22:33:57 | 显示全部楼层
yunshuizhixi 发表于 2017-2-23 21:43
想请问一下,一楼的例子滴定结果应该是1/4推荐用量能够能更好的区分阴性和阳性峰,在这两种抗体用量的流式 ...

最典型的变化应该是阴性群增高,而阳性群增高到一定程度就不继续增高了。
但我这里的滴定结果和你那边出现的现象,原因我也不能肯定,这里面我个人觉得是不是涉及到抗体和抗原结合的动力学,例如抗体过量后竞争性结合抗原位点,反而导致结合不牢固被洗涤?确实需要思考一下。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2018-12-5 23:49:49 | 显示全部楼层
想请教一下,滴定时要blocking 和染死活细胞吗,实际操作时是需要的。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
 楼主| 发表于 2018-12-6 07:56:20 | 显示全部楼层
seall 发表于 2018-12-5 23:49
想请教一下,滴定时要blocking 和染死活细胞吗,实际操作时是需要的。

有条件加。实际操作都不加。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2019-9-18 20:56:00 | 显示全部楼层
学到了,分群不佳的时候可以考虑抗体的用量问题
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2019-10-10 13:06:16 | 显示全部楼层
爱白衣杀手 发表于 2015-8-20 08:37
倪老师,我也发现了。推荐用量5ul其实太大了,只要1ul就非常好了。我滴定了八种抗体,5种是1ul,三种是0.25u ...

我想请教一下滴定和结果判定的具体步骤,第一次做,小白,。。。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2019-10-11 08:03:47 | 显示全部楼层
hey,Jude 发表于 2019-10-10 13:06
我想请教一下滴定和结果判定的具体步骤,第一次做,小白,。。。

顶部搜索栏输入“滴定”,就能找到一堆,其中就有具体方法
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2019-10-23 17:30:28 | 显示全部楼层
倪老师,发现一个问题,就是你图上5ul的细胞的MFI比2.5ul 抗体染色的还要低,是不是电压调低过?所以滴定的时候电压是否需要保证一致?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2019-10-25 07:46:02 | 显示全部楼层
lxk47640 发表于 2019-10-23 17:30
倪老师,发现一个问题,就是你图上5ul的细胞的MFI比2.5ul 抗体染色的还要低,是不是电压调低过?所以滴定的 ...

不是,没调过电压。
这就是抗体和抗原结合的钩状效应,因此需要确定一个最佳浓度,这个浓度一般不是最大,也不是最小。
流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2020-11-15 04:30:48 | 显示全部楼层
倪老师,我想请教一个问题,做滴定的时候可以用别的组织做吗?比如我做胎盘,可以用spleen来做滴定吗? 谢谢!
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则 需要先绑定手机号

手机版|流式中文网 ( 浙ICP备17054466号-2|浙ICP备17054466号-2 )

浙公网安备 33038202004217号

GMT+8, 2024-3-29 07:39

Powered by Discuz! X3.5

© 2001-2024 Discuz! Team.

快速回复 返回顶部 返回列表