机械法粉碎组织，商品化组织粉碎器好还是手工法好？

niwanmao

流式细胞术检测的标本类型为细胞悬液，所以只要标本最终能够解离成单细胞，就可以用流式检测。这使得流式细胞术的应用越来越广，不过组织标本的解离却是个难题。目前最常用的是酶消化法和机械法。酶消化法耗时较长，并且不同组织需要使用不同的酶，消化后细胞表面抗原容易受到影响，所以应用受到限制。因此，目前大多数都还是尽量采用机械法。机械研磨现在出了不少商品化机器，例如BD、美天旎等公司均有。这些研磨机器和手工法究竟哪种好？

这里我们来看一篇文献（Bethany D. Vallangeon等人在Cytometry. Part B, Clinical cytometry. 2015 Sep.发表的Improved Detection of Diffuse Large B-Cell Lymphoma by Flow Cytometric Immunophenotyping – Effect of Tissue Disaggregation Method），在文章中作者研究了弥漫大B细胞淋巴瘤这类疾病，对比了51例机器研磨、27例手工研磨的标本和15例结合机器研磨和手工研磨的组织。

结果
手工法，肿瘤克隆检出率88.9％，机器和手工结合的检出率仅为66.7％，而机器研磨仅为62.7％。

可见，手工法还是具有较大的优势，这里介绍一下手工法与大家共享：

组织用RPMI1640浸泡保存。接收到后，用镊子固定组织，然后5ml或10ml 21号针头不断的戳，直到戳烂为止，然后注入大约3ml PBS（含0.1％叠氮钠），将细胞冲出，然后转移到RPMI1640内，1300rpm离心5分钟，收集细胞团块。进行后续染色操作。

商品化机器研磨的步骤：


手工研磨的方法，其实主要是靠针头戳，最后一张小图粉色悬液是手工研磨结果，白色悬液是机器研磨结果：



手工法和机器法对比结果，从左到右的4列依次是手工法（淋巴结组织）、手工法（结外组织）、机器法（淋巴结组织）、机器法（结外组织）。

                               
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