“反设门”究竟是什么？

niwanmao

平常，经常会碰到一些在FSC/SSC或者其它散点图上分群不清的情况，这时，如何圈中目的细胞而不会将干扰细胞选进去，对于分析结果准确与否十分关键。如果你在其中加入了某个特异性的标记能够选出该类细胞，那么采用“反设门”（backgating）是个靠谱的方法。

其实以前论坛上很多FLOWER也都问过究竟什么是“反设门”，费尽口舌，但还是应该有不少新手不了解，所以在此结合图形解释一下“反设门”的概念。

先看下面这个图，箭头指向代表我们要解释的顺序，A图是未设门的散点图（此处SSC采用了LOG，可能有些站友看不惯，没关系，其实LOG只是把几群细胞的间距拉近了、压扁了，分布还是一样的），从A图可看出，淋巴细胞和单核细胞分群不是特别清，其中稍微有点交叉在一起，此时，我设淋巴细胞的门应该边界怎么设置可以防止单核细胞的干扰呢？



对了，就是反设门，B图开始就是反设门的步骤，首先选择CD45高表达并且CD14阴性的细胞，设为P1门，门内就是很纯粹的淋巴细胞了，将P1门内细胞显示在FSC/SSC散点图上，可以看到，确实淋巴细胞有些拖尾拖到单核细胞区域内，于是我们就知道了，要避开那些零零散散的拖尾，选择单纯的淋巴细胞群体，设为P2。再去看P2门内的细胞，就能够看到P2门内的细胞是很纯的淋巴细胞，只有0.3％的单核细胞干扰。


聊到这里肯定又有站友要问了，这样圈不是损失一些淋巴细胞信号了吗？确实会损失，但是比较少。另外，其实我们还可以利用CD45/SSC很好地区分开淋巴细胞和单核细胞。但是我们今天其实不是讨论淋巴细胞的设门方法，只是借此案例，告诉大家什么是“反设门”，反设门是怎么用的，怎么来帮助我们来选择更纯的目标细胞，仅此而已。☰☱

hellenli

每日一学{:soso_e179:}

liuzh0217

学习学习，

大礼

老师好，那P1门根据什么来确定p1门应该设置在上图位置，谢谢

niwanmao

大礼 发表于 2016-7-5 15:44
老师好，那P1门根据什么来确定p1门应该设置在上图位置，谢谢

这里的P1是CD45高表达而CD14－的细胞，就是淋巴细胞比较特异性的表达pattern，圈好之后，看看淋巴细胞在哪个位置，再群新的门。

大礼

niwanmao 发表于 2016-7-5 18:13
这里的P1是CD45高表达而CD14－的细胞，就是淋巴细胞比较特异性的表达pattern，圈好之后，看看淋巴细胞在 ...

刚开始学习这方面的知识，有许多不懂的地方望不吝赐教，非常感谢老师解答

大礼

大礼 发表于 2016-7-6 14:24
刚开始学习这方面的知识，有许多不懂的地方望不吝赐教，非常感谢老师解答 ...

老师您好，流式图的十字门怎么确定，确定的标准和依据是什么，有的是正中央，有的是偏左或偏右，还有偏上偏下的，有点迷糊，望老师，非常感谢

大礼

niwanmao 发表于 2016-7-5 18:13
这里的P1是CD45高表达而CD14－的细胞，就是淋巴细胞比较特异性的表达pattern，圈好之后，看看淋巴细胞在 ...

老师您好，流式图的十字门怎么确定，确定的标准和依据是什么，有的是正中央，有的是偏左或偏右，还有偏上偏下的，有点迷糊，望老师，非常感谢

niwanmao

大礼 发表于 2016-7-7 11:25
老师您好，流式图的十字门怎么确定，确定的标准和依据是什么，有的是正中央，有的是偏左或偏右，还有偏上 ...

参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5268-1-1.html

fitlao

老师您好，如何使圈好的门内细胞改变颜色。还有C到D操作上是如何实现的？我使用的是flowjo软件，谢谢！