冻存的淋巴细胞，复苏后多久测最好？

niwanmao

流式中，最苦恼的是标本的保存。为了实现长时间保存标本，或者为了提高检测效率，大家目前普遍采用的是冻存在液氮中，需要检测的时候复苏、检测。
但是不知道大家有没有考虑过，复苏后培养多久检测，其结果与新鲜标本最接近呢？

2016年4月份的《Journal of Immunological methods》杂志中一篇《A global look into human T cell subsets before and after cryopreservation using multiparametric flow cytometry and two-dimensional visualization analysis.》告诉我们，复苏后培养1小时的标本，其检测淋巴细胞比例、单核细胞比例以及CD4＋T、CD8＋T、记忆T等亚群最接近新鲜标本，而刚复苏（即复苏0小时）和复苏后培养24小时的标本都存在明显的统计学差异。

直接看下面三幅图，前两幅是箱体图，横坐标标本类型（新鲜标本、复苏后0、1、24小时标本），纵坐标是比例，最后一幅是特殊的扇形图，从内到外可看出各类细胞之间的隶属关系。





可见，复苏后不同时间点检测对结果影响还是挺大的，因此，建议大家还是冻存复苏后培养1小时检测最好。
全文链接：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27129808在线阅读全文（无需下载，支持划词翻译，积分限制）：

游客，本帖隐藏的内容需要积分高于 70 才可浏览，您当前积分为 0

不过看了这篇文章，深觉得冻存复苏的变数还是挺大的，尤其其中的技巧如果掌握不好，对结果影响很大。如果涉及到临床检测（特别是第三方），不能冻存标本，在路上又需要运输好几天，尽管在4度下肝素抗凝最长可以保存7天，但那是理论上的期限，而且临床上抽取标本的时间、到实验室后检测的时间、补做抗体的时间均使得检测存在很大变数。所以，找到一个能够长期保存标本的方法对于检测质量，尤其是以后实现免疫分型的质量控制特别重要。
在这里，稍稍公开一点我最近半年研究保存标本方法的进展，经过几次失败后，最近这次测试了一个月，数据很理想，在这一个月中，细胞比例和各种CD分子的MFI均没有非常显著的变化。


更高兴的是，在另一个0.5％的多发性骨髓瘤标本中，保存一个月后，尽管淋巴细胞比例发生了轻微降低，但是这类以前被认为特别容易被破坏的骨髓瘤细胞仍然还在，比例在0.6～0.7％之间。
接下来我会继续研究和测试各种环境下的保存稳定性，希望在不久的将来，该产品能够尽快和大家见面，为流式细胞术的质量控制、标准化做出贡献。
－－EOF－－

Victorrwang

第一篇挺潮的，SPADE 和viSNE都用上了

sumire

所以，还是新鲜获取的更好了……谢谢分享