想让你在不同条件的检测结果具有可比性吗？

niwanmao

无论临床还是科研（相对来说科研上可能用得更多），为了使不同仪器、不同条件、不同时间检测的荧光强度具有可比性，众多FLOWER煞费苦心。很多人想到了用空白或同型对照调整阴性细胞群位置，但不知道你们有没有想到用标准荧光定量微球？

荧光定量微球是指一系列在微球表面标记了特定数量荧光分子的微球，因为微球表面的荧光分子数量已知，即等量可溶性荧光素分子（MESF）已知，所以将仪器检测得到的荧光值（arbitrary units， a.u.）作相关性分析，即可拟合得到标准曲线及其对应的公式。




有了这条标准曲线，用标本检测得到的荧光值（a.u.）代入曲线拟合公式中，就能计算出MESF值，只要每次这个值，不会因为仪器、电压条件、时间而变化，那么你每次检测的结果，就具备了高度的可比性。

不过我个人觉得，在临床上用得可能不多，除非一些需要进行精准定量的抗原表达监测，而科研上可能会用处更大，例如监测转染后的GFP、转录因子等蛋白表达量的变化，用绝对定量的MESF，你就不用担心仪器不同、电压变动对你结果的影响。

聊到这里，有些FLOWER可能会说，我老早就知道这方法了。确实，这个方法不是新方法，是老生常谈，但可能会对一些新入门的FLOWER会有启示，故今天重提。此外，更重要的是，今天谈到这个主要是看到这篇文章《FlowCal: A user-friendly, open source software tool for automatically converting flow cytometry data from arbitrary to calibrated units》，文章发表于2016年4月份，里面介绍了他们原创的Python脚本：FlowCal，这个Python软件包可以根据你的荧光定量微球和实验数据，自动进行曲线拟合和MESF值的自动计算，帮助手册和下载地址：http://taborlab.github.io/FlowCal/

相信有了这个好工具，荧光定量对你们都不在话下。
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Victorrwang

beckman的仪器不知道，bd有CST或者setup  beads做daily QC。

niwanmao

Victorrwang 发表于 2016-5-12 12:46
beckman的仪器不知道，bd有CST或者setup  beads做daily QC。

这里的微球不是那种质控微球，而是荧光定量的微球，主要是Quantum和Rainbow的。
质控微球BD的有CS&T，Beckman的有flowCheck。