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猜猜流式细胞术怎么用在慢性鼻窦炎上?

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发表于 2016-5-17 21:19:26 | 显示全部楼层 |阅读模式

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慢性鼻窦炎,是一个难缠的慢性疾病,说大不大,但特难受。慢性鼻窦炎的用药,也是个难题,用抗生素,乱用药不行,而且时间长了耐药,不用吧,如果是细菌感染导致怕越来越严重。
这里,流式细胞术可以帮上忙,2016年最新一期的Plos ONE上,Carlson-Jones JAP等人发表了一篇《Enumerating Virus-Like Particles and Bacterial Populations in the Sinuses of Chronic Rhinosinusitis Patients Using Flow Cytometry》,给慢性鼻窦炎患者的用药指导带来了一丝光明。
文中的方法比较简单,取慢性鼻窦炎患者的上颌窦冲洗液,设置5组,一组未处理,仅用0.2μm过滤的TE缓冲液(10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 7.4)稀释,另外四组分别用Sputasol(一种痰液消化液)、甲醇、枸橼酸钾、焦磷酸钠处理,最后的染色用DNA染料SYBR-I Green(终浓度1:20000),80度避光作用10分钟。最后,检测冲洗液里面的细菌(Bacteria)和病毒样颗粒(Virus-like particle),如下图:
journal.pone.0155003.g001.jpg



不过大概浏览了下,我貌似还没理解为什么设这五组的原因,以及单纯用SYBR-I Green就能鉴别出细菌和病毒样颗粒?如果哪位FLOWER读懂了跟帖告诉我一声。


文献全文地址:http://journals.plos.org/plosone ... ournal.pone.0155003




发表于 2016-5-17 22:54:17 | 显示全部楼层
感谢版主的推荐,仔细看了原文,1)五组处理应该是作者考虑到不同的环境和机体微生物取材的问题,即尽量破坏细菌和病毒的生物膜等结构,以释放出其中含有的细菌和病毒达到反应真实状态的目的,2)用sybr green标记应该是考虑到细菌的dna比较长,因此嵌入荧光染料信号强,加上病毒与细菌在体积和胞内结构方面的差异,所以两者可以区分开来,不知道解释可不可以???
发表于 2016-5-18 11:39:28 | 显示全部楼层
病毒颗粒那么小,流式能检测到么……
发表于 2016-5-18 12:36:24 | 显示全部楼层
小憨 发表于 2016-5-18 11:39
病毒颗粒那么小,流式能检测到么……

用荧光触发,小也能检测到吧
发表于 2016-5-18 13:26:01 | 显示全部楼层
ypfbluesky 发表于 2016-5-18 12:36
用荧光触发,小也能检测到吧

老觉得哪里怪怪的……为什么不做ELISA或测滴度的
 楼主| 发表于 2016-5-18 18:38:36 | 显示全部楼层
汇总一下微信上几位站友的意见:


晓雪:
病毒的大小散射光已经到极限了,细菌还可以有数值,加上dna含量的差异所以区分了两类病原体,但是小的到底是不是病毒还是别的能去定吗,毕竟已经到检测下限了,感觉有些局限


彦泽他爹:
我的理解是:对于流式检测病毒的方法,在既往文献报道中描述过五种方法,作者是想比较一下哪种方法好;至于细菌和病毒的区分应该是因为病毒里的DNA含量肯定是少于细菌的,再结合大小和颗粒度便可简单区分。具体的解释在引文21和24中应该会有更详细的解释。


其中晓雪站友的意见我比较赞同,尽管文中说的是病毒样颗粒,指的不一定是病毒,但毕竟这么小范围内,不排除一些碎片信号。
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