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[流式protocol] OMIP-017:目前最详尽的人CD4+辅助T细胞亚群检测方案

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发表于 2016-9-8 18:34:57 | 显示全部楼层 |阅读模式

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活化CD4+T细胞可分化为各类辅助T细胞亚群,每种亚群均有其特定的表型、细胞因子谱以及功能。
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生发中心的B细胞滤泡要分化成熟为高效的浆细胞,需要一种特殊的CD4+T细胞,即滤泡辅助T细胞(Tfh),这类细胞表达CXCR5,可诱导B细胞归巢到生发中心内的滤泡树突细胞网络内,接受抗原刺激。

本方案可检测Th1、Th2、Th9、Th17、Th17Th1、Th22和Tfh,并为此而进行了荧光素和抗体搭配优化,适用于冻存复苏的PBMC和新鲜标本。其它组织样本未测试。

Specificity
Clone
Fluorochrome
Purpose
CD3
UCHT1
Ax594
Lineage
CD4
OKT4
QD800

CD8
RPA-T8
QD585

CXCR5
RF8B2
Ax647
TFH
CCR4
TG6/CCR4
PE-Cy7
Th subsets
CCR6
G034E3
BV605

CCR10
6588-5
PE

CXCR3
1C6/CXCR3
PE-Cy5

CCR7
150503
Ax680
Differentiation
CD45RA
5H9
QD655

CD161
DX12
FITC
Exploratory
PD-1
EH12.2H7
BV421

Dead cells
AqBlu
Dump


下图示范了设门方法:
A图排除粘连体后,用CD3/Aqua(活性染料)选择活的CD3+T细胞,接着选择淋巴细胞门和CD4+CD8-辅助细胞,最后进行各亚群的分析,A图中间这几个小图作者未说明,我个人认为是用于排除一些非特异性染色导致的过高荧光。
B图圈出CXCR5+ Tfh细胞,分析其占CD4+T细胞比例,后面4个小图显示的是Tfh的CD150、PD-1、CCR7、CD45RA、CXCR3、CCR4、CCR6、CCR10等表达,蓝色为Tfh,灰色背景为CD4+T细胞。
C图、D图分别圈出Th2、Th1、Th17、Th17Th1、Th9、Th22等亚群。
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发表于 2016-9-8 19:47:56 | 显示全部楼层
如果是加上cd25,cd127,就能加上Treg了。
 楼主| 发表于 2016-9-9 13:17:29 | 显示全部楼层
hbezyr 发表于 2016-9-8 19:47
如果是加上cd25,cd127,就能加上Treg了。

嗯,Treg和Tc还是需要另外做的
发表于 2016-10-29 23:45:57 | 显示全部楼层
老师您好! 我觉得d图中cxcr10的阳性部分比较牵强 th22的那一群不是很明显啊
另外,想请问这张图来源于哪篇文献?可否告知文章题目,想看一下全文 谢谢老师!
 楼主| 发表于 2016-10-30 14:16:33 | 显示全部楼层
时光成熟 发表于 2016-10-29 23:45
老师您好! 我觉得d图中cxcr10的阳性部分比较牵强 th22的那一群不是很明显啊
另外,想请问这张图来源于哪篇 ...

Pubmed上搜索OMIP-017即可
发表于 2016-12-6 15:44:08 | 显示全部楼层
要求70分才能看,看不了啊
 楼主| 发表于 2016-12-6 19:24:58 | 显示全部楼层
cj2lx 发表于 2016-12-6 15:44
要求70分才能看,看不了啊

你不是已经超过70分了吗?可以看的呀,那个提示是无论有没有权限都会提示在那里的。
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