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楼主: ps654321

[试剂耗材] 这俩染料需要调节补偿么?

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发表于 2016-12-23 08:07:55 | 显示全部楼层
jiangmeng 发表于 2016-12-23 02:24
老师你好,请教一个问题。 比如我们检测某个细胞的ROS,用的探针是用FITC这个通道检测的,那么我们可不可 ...

ROS的探针是在FITC检测,但其检测原理和普通CD分子不是完全一样,是渗透入细胞内,与细胞内的ROS起反应后发出荧光。所以不是很建议,最好能够找一个像普通表面分子那样染色的最好,步骤一致,相当于把其它因素都控制一样了。

PI也不建议代替PE,因为两者激发光和发射光不完全一致。
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发表于 2016-12-27 10:47:10 | 显示全部楼层
我觉得还是要调一下吧,因为我做的percp3通道和apc4通道,交叉图会有尖尖,所以可能稍微调一下应该可以,虽然从原理上不用调,但是实践起来还是有差别的吧,拙见,,
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发表于 2016-12-28 23:04:10 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-12-23 08:07
ROS的探针是在FITC检测,但其检测原理和普通CD分子不是完全一样,是渗透入细胞内,与细胞内的ROS起反应后 ...

谢谢老师。
老师,我有几个问题:
1.  如果我用PI排除死细胞,那么抗体是不是不能有带PE的抗体?这样会有影响吗?
如果是这样的情况,那么用DAPI是不是也不能同时加用相应颜色的抗体?
还是只需要逻辑上分开就行了,因为我检测的都是活细胞,所以不用管PI或者DAPI的问题。

2. 排除死细胞是不是每个样本,包括对照组都需要加用PI或者DAPI?

3. 流式抗体直接一抗带荧光的好?还是二抗带荧光的?还有如果没有相应的直接一抗带荧光的抗体,需要使用二抗带荧光的抗体,那么这时候我们应该怎么设置相应的对照组?如阴性对照等等


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