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避免标本堵机器的4大绝招

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发表于 2016-12-8 21:02:58 | 显示全部楼层 |阅读模式

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流式细胞仪除了硬件问题之后,平时最怕的就是标本堵了进样针,因为进样针是机器上最细的部分,一旦堵牢,你就取不到信号,或者只取到一些噪音。我们经验丰富一点的还会去冲一下机器(参见论坛内《BD FACSCanto II进样针堵的应对绝招》,下次发一篇Beckman Navios的进样针除堵帖),但大多数人只能叫工程师。无论如何,都会耽误实验,甚至导致实验失败。

所以,最好的办法就是:预防。所谓〖预防〗,就是事先保证样本内是十分单纯的单个 --活细胞。

这里谈一下导致样本形成团块堵住进样针的3个常见原因,然后结合原因提出对策,最后再加1个终极绝招,收好勿谢!

1、死细胞

死细胞可释放出核内DNA,DNA的粘性会导致细胞粘附在一起形成团块。

解决方法
    如果您的样本死细胞过多,那么建议每ml标本中加入1单位DNAse,可有效减少这种情况。
    名词解释:所谓1单位DNAse指的是在37°C、10 mM Tris·HCl, pH 7.5, 50 mM MgCl2, 13 mM CaCl2条件下,10分钟内降解1ug质粒NDA所需要的酶量。

2、阳离子
钙离子和镁离子可促进细胞成团。

解决方法
    1、使用不含Ca++和Mg++的PBS作为缓冲液进行染色、洗涤
    2、可往缓冲液中加入1mM EDTA(如果你用Qdot染料,这步就很重要,参见https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21182185)


3、离心力过大
如果离心力过大,会导致细胞离心沉淀后的团块过硬,就很难分开。

解决方法
    需要事先了解每台离心机的离心速度和离心力的换算,幸运的是,现在大多数高档离心机都有离心速度和离心力两种方式可用。记得摸索出适合你实验细胞类型的离心力(最好用离心力,更客观)。我们平时的离心力一般用400~500g。


4、没注意,团块形成了,怎么办?

只能祭出终极招数了:过滤样本

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