PMA刺激T细胞后分泌IFN-γ，检测不到TNF-α

Jing310 · 发表于 2016-12-16 10:04:33

用PMA刺激T细胞，12小时后加入抑制剂，5小时后做胞内染色，能检测到IFN-γ，却检测不到TNF-α的分泌？这是什么原因呢？按理说IFN-γ有分泌，说明细胞被激活了，为什么检测不到TNF-α的分泌呢？

niwanmao · 发表于 2016-12-16 20:00:11

两者并一定同步表达啊。

Jing310 · 发表于 2016-12-19 15:38:20

niwanmao 发表于 2016-12-16 20:00
两者并一定同步表达啊。

老师，那请问是PMA刺激时间的原因吗？是不是TNF-α需要刺激更长时间？

小憨 · 发表于 2016-12-19 16:57:04

Jing310 发表于 2016-12-19 15:38
老师，那请问是PMA刺激时间的原因吗？是不是TNF-α需要刺激更长时间？

T细胞会表达大量的TNF-α吗？我还是第一次听说

Jing310 · 发表于 2016-12-20 11:05:06

小憨发表于 2016-12-19 16:57
T细胞会表达大量的TNF-α吗？我还是第一次听说

可以得，但是从文章流式图上看不会像IFN-γ那么多

Victorrwang · 发表于 2016-12-21 09:39:38

本帖最后由 Victorrwang 于 2016-12-21 11:44 编辑

看细胞了，比IFN-gamma多也很正常

Jing310 · 发表于 2016-12-22 10:23:50

Victorrwang 发表于 2016-12-21 09:39
看细胞了，比IFN-gamma多也很正常

您好，我想问下测TNF-α分泌时，PMA刺激方法跟测IFN-γ一样吧？
我做了两个时间点，一是PMA刺激24小时，二是刺激12小时，IFN-γ都有分泌，但TNF-α都没有分泌。不知道怎么回事。

Victorrwang · 发表于 2016-12-23 01:33:55

Jing310 发表于 2016-12-22 10:23
您好，我想问下测TNF-α分泌时，PMA刺激方法跟测IFN-γ一样吧？
我做了两个时间点，一是PMA刺激24小时， ...

PMA + Ionoymcin for 4 hours with golgistop or(and) golgiplug

hbezyr · 发表于 2016-12-24 17:08:49

1.你只是用了PMA来作刺激？

2.你的时间是不是有点长了？浓度是多少？
3.你的阻断剂是什么？做TNFa时，必须是加BFA才行.

Jing310 · 发表于 2016-12-26 09:46:46

hbezyr 发表于 2016-12-24 17:08
1.你只是用了PMA来作刺激？

2.你的时间是不是有点长了？浓度是多少？

1 我只是用了PMA和离子霉素；
2 下次我再缩短时间到5-6小时看看，浓度那个买来是250X的
3 我加了阻断剂，是Golgiplug，这个里面含有BFA

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