分群圈门

会开花的笔

当单染管细胞分群明显的时候，大家是仍按照CON的阴性门计算阳性率还是直接在阳性管里把分群的细胞圈出来，还是说看CONT管情况，如果CONT管分群就按照十字门，如果CONT不分群，就用分群的圈，如图，大家是选图1还是图2的方法？我看临床上圈门其实蛮少用十字门，多任意圈门？不知道是不是这样？请大神指导

niwanmao

阴阳性分群清楚时，直接用十字门将其分隔，计算阳性率，但也是基于样本“内对照”阴性背景，并非任意圈门

maomao

我觉得如果阳性管分群明显，可以直接在阳性管做十字门，再应用到阴性管。这样就可以避免所谓的缺少同型对照而造成的假阳性。

会开花的笔

好的，谢谢大家，今天上流式又遇到一个问题，3管样品，用不同的抗体combine,其中有一个胞内的抗体，在3管的比例都不相同，而且还相差很大，不知道是什么原因呢？感觉每次都很注意样品的混匀了，这样的结果都害怕用啊，，，，还有上机的时候，如下图所示，门外好多散点，不知道是什么呢

niwanmao

会开花的笔 发表于 2016-12-23 21:55
好的，谢谢大家，今天上流式又遇到一个问题，3管样品，用不同的抗体combine,其中有一个胞内的抗体，在3管的 ...

1、胞内破膜后，一些表面抗体荧光会出现非特异性增强，不能用表面标记时的门来衡量。
2、建议先进行FcBlock，然后再做，并且检测时增加死活细胞染料，分析时排除死细胞，结果会稳定很多。

会开花的笔

我是胞内胞外的抗体一起染的 ，阴性对照也破膜了，除了没加抗体其他步骤都一样，先染的胞外，再固定破膜染胞内，每次加抗体前都进行了封闭，可结果却发现3管里面那个胞内的表达差别这么大