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[流式protocol] 流式中文网MemMagician新型破膜剂使用说明

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发表于 2016-12-25 15:38:15 | 显示全部楼层 |阅读模式

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100Test:
A液(7ml),含10%多聚甲醛等固定成份。
B液(4ml),含专利性破膜成份、1%多聚甲醛、PBS(磷酸盐缓冲液)

50Test:
A液(3.5ml),含10%多聚甲醛。
B液(2ml),含专利性破膜成份、1%多聚甲醛、PBS(磷酸盐缓冲液)

步骤:
1、在空白流式管,加入表面抗体,然后加入100ul 样本,避光、室温作用10分钟。直接加入A液60ul(样本:A液=5:3),作用5分钟。
2、加入2ml PBS,充分吹打均匀,500×g离心5分钟,尽量去干净上清。
3、以100ul PBS重悬。对重悬后的样本体积进行评估,一般大约在150ul左右。
4、加入B液50ul(务必保证样本:B液=3:1,如果第3步中重悬后样本总体积>160ul或<140ul,请按此比例进行调节),并接着加入要检测的胞内/核内抗体,避光、室温作用20分钟(如为核内抗体,可适当延长时间至30分钟)。
5、加入2ml PBS,充分吹打均匀,500×g离心5分钟,去上清,根据需要,用100~500ul PBS重悬,上机检测。
综合所有操作步骤,总时间为45~50分钟。

小贴士:
(1)B液同时可破膜和裂解红细胞,无需额外进行裂解,为保证裂红效果,建议在加入B液后充分混匀。
(2)如果要检测轻链或免疫球蛋白,建议事先用10倍体积的PBS洗涤三次,然后再执行前述操作。
(3)如若极少数患者样本可能在最后一步离心后仍可见红细胞成团明显,建议加2ml 1×氯化铵裂解液,继续作用10分钟,观察颜色是否澄清,如仍无变澄清,可反复多次。
10×氯化铵裂解液储存液500ml的配制方法为:40.1 g NH4Cl 、4.2 g NaHCO3、1.85 g EDTA二钠,加水至400ml,充分溶解后,继续加水至终体积500ml。将10×氯化铵裂解液储存液与蒸馏水以1:9稀释,即可得到1×氯化裂解液。
(4)检测过程中必须使用的PBS(磷酸盐缓冲液)请自备,亦可用生理盐水代替。

2016120502YangZhongHuiPerfix.jpg
用于对比的某商业化破膜剂,FSC减小明显,表面标记影响较大。但胞内结果稳定。
2016120502YangZhongHui对比.jpg
同样的标本,用流式中文网原研的MemMagician新型破膜剂,无需额外裂红,时间缩短,FSC和表面标记保持稳定,比例与商业化破膜剂无显著差异。而价格亲民

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发表于 2017-7-25 09:39:57 | 显示全部楼层
倪老师,流式中文网有破胞膜和核膜的破膜剂卖吗?
能不能发个链接给我
 楼主| 发表于 2017-7-25 10:53:53 | 显示全部楼层
Justin-威 发表于 2017-7-25 09:39
倪老师,流式中文网有破胞膜和核膜的破膜剂卖吗?
能不能发个链接给我

目前这个破膜剂测试不少样本,但都只是测试了胞内标记,效果很好,但是核内的抗原还没有进行测试,所以目前还只是作为试用装赠送。你可以联系zhanghong@flowcyto.cn,注明试用申请,并写明通讯地址,申请一下试用。
发表于 2017-7-25 13:21:34 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-7-25 10:53
目前这个破膜剂测试不少样本,但都只是测试了胞内标记,效果很好,但是核内的抗原还没有进行测试,所以目 ...

好的,谢谢倪老师
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