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昨天做了用山羊血清封闭对直标法的结果的影响,现把结.....

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发表于 2016-12-30 10:41:01 | 显示全部楼层 |阅读模式

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图片4.png 图片3.png 图片2.png 图片1.png
以上是实验结果,因为一抗为兔的多抗,所以没办法做同型对照





实验材料

1;一抗:FITC标记兔多抗CD3E(浓度0.3mg/ml)
2; 浓缩型山羊血清

3;细胞用PBS缓冲液

4;样本:Jurkat细胞(2x107 /ml

实验分组
            
   
直标分组
   
羊血清或羊IgG用量
   
一抗用量
   
A1BLANK
   
0μl
   
0μl
   
A2
   
0μl
   
5μl
   
A3
   
50μl
   
5μl


直标实验步骤:

1;取31.5ml EP管,每管加200μl 样本细胞,标记A1A2A3

2;根据实验分组分别加入相应量的浓缩型山羊血清,37度孵育10分钟,不洗。


3;根据实验分组分别加入相应量的一抗,37度避光孵育30分钟。离心清洗3次,转速1500rmp/min,时间为每次5分钟。

4;上机分析结果。(FITC通道电压默认为124,手动调节为30,补偿无需调节。用BLANK组画散点图,圈门,再画叠加直方图,观察趋势)




期待大家对这次的实验提供宝贵的意见

















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发表于 2017-1-1 11:49:32 | 显示全部楼层
这都没标记上啊,jurkat不应该是CD3阳性的吗?你看你这两管样品不管用不用山羊血清封闭都是阴性,为什么呢?
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 楼主| 发表于 2017-1-3 15:46:32 | 显示全部楼层
小憨 发表于 2017-1-1 11:49
这都没标记上啊,jurkat不应该是CD3阳性的吗?你看你这两管样品不管用不用山羊血清封闭都是阴性,为什么呢 ...

请问一抗的孵育条件一般是怎么样的?我现在都是37度半小时,不知道够不够
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2017-1-3 20:52:20 | 显示全部楼层
Justin-威 发表于 2017-1-3 15:46
请问一抗的孵育条件一般是怎么样的?我现在都是37度半小时,不知道够不够 ...

为什么不室温呢?
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 楼主| 发表于 2017-1-4 08:40:30 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-1-3 20:52
为什么不室温呢?

现在室温比较低,十几度,孵育时间不好把握啊
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发表于 2017-1-4 19:55:29 | 显示全部楼层
Justin-威 发表于 2017-1-4 08:40
现在室温比较低,十几度,孵育时间不好把握啊

37度有点高,我们平时十几度~二十几度之间做。不过温度应该不是这次实验的关键点,我的建议是用T细胞做会不会更好,因为细胞株传代过程有可能出现问题。
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 楼主| 发表于 2017-1-5 09:27:45 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-1-4 19:55
37度有点高,我们平时十几度~二十几度之间做。不过温度应该不是这次实验的关键点,我的建议是用T细胞做会 ...

倪老师,如果是室温,一抗一般孵育多长时间是比较的呢?另外我试了下样本固定后再做,结果出了阳性,我把实验结果发了帖子。固定出阳性,不固定就没阳性,这说明什么问题?
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发表于 2017-1-5 19:59:51 | 显示全部楼层
Justin-威 发表于 2017-1-5 09:27
倪老师,如果是室温,一抗一般孵育多长时间是比较的呢?另外我试了下样本固定后再做,结果出了阳性,我把 ...

我们平时临床样本都是15分钟。
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