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固定对细胞影响这么大么?

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发表于 2017-1-5 08:56:26 | 显示全部楼层 |阅读模式

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固定后.png 不固定.png
Jurkat细胞固定(4%多聚甲醛20分钟)和不固定两种处理方式跑出来的散点图差异比较大,固定后的细胞成明显的一团,没固定的左下方有一片斜向上的一团,区别于主要的细胞团,不知道是什么。大家看看固定对细胞的影响是否比较大
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发表于 2017-1-5 19:59:21 | 显示全部楼层
这是因为固定过之后,细胞FSC变小,于是与原来碎片区域重叠了。4%的多聚甲醛是比较厉害的。
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 楼主| 发表于 2017-1-5 08:57:59 | 显示全部楼层
试过好几次,每次的情况都是这样。两种处理方式的细胞来源于同一瓶培养细胞
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发表于 2017-1-6 12:37:13 | 显示全部楼层
固定后细胞死了,只有一群;没有固定的细胞大部分是活的,所以有两群。
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 楼主| 发表于 2017-1-6 16:42:36 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-1-5 19:59
这是因为固定过之后,细胞FSC变小,于是与原来碎片区域重叠了。4%的多聚甲醛是比较厉害的。 ...

倪老师,如果是这样的话,细胞和碎片重叠了,设门岂不是误差很大(圈定这一群细胞后里面其实有很多是碎片)。还有一个问题要是只做单染,不做多色,每次实验都染PI,用来标记碎片,可行性大不大
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发表于 2017-1-6 17:28:53 | 显示全部楼层
Justin-威 发表于 2017-1-6 16:42
倪老师,如果是这样的话,细胞和碎片重叠了,设门岂不是误差很大(圈定这一群细胞后里面其实有很多是碎片 ...

是的,所以要么不固定,用死活染料区分。
要么固定后,加上特异性的标记分群。
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