DNA指数相关问题

FCMao

最近看到3篇文献，都采用PI染色结合胞浆免疫球蛋白轻链染色，来分析浆细胞疾病限制性轻链的DNA指数。

文献的方法中提到两个概念1. DNA指数 2. 胞浆免疫球蛋白指数（CIg)，文中描述如下：

To quantitate the cellular DNA content, DNA index (DI) was determined and calculated as the ratio of the mean for each lightchain-
positive G0/1 DNA peak divided by the mean of the lightchain- negative diploid G0/1 peak on the X axis. A DI between 0.99 and 1.01 was referred to as diploid, while hyperdiploid implied DI＞1.01 and hypodiploid DI＜0.99. The excess of kappa- or lambda-positive cells identified the involved or light-chainrestricted (LCR) cell population, the percentage of which was calculated in relation to the total number of gated events. Among the LCR cell population, discrete populations of cells with different DI were identified, which we refer to from here on as DNA stem lines. The involved DNA stem line with the highest percentage was considered dominant.



To quantitate the cytoplasmic immunoglobulin content of a light-chain-positive population, the cytoplasmic immunoglobulin index (CIg) was used and calculated from the ratio of the geometric mean of the Y axis (cytoplasmic immunoglobulin fluorescence intensity) for the light-chainpositive
G0/1 peak divided by the Y axis geometric mean of the light-chain-negative diploid G0/1 population. The CIg of each distinct DNA stem line was calculated as explained above.


因为没做过类似分析，我有些不明白，1. DNA指数是指轻链阳性G0/G1峰的平均荧光强度与轻链阴性性G0/G1峰的平均荧光强度的比值，CIg指数和DNA指数有啥区别？CIg指数的计算不是很明白。
2. DNA stem line这部分不明白。
3. 平均荧光强度只是个相对值，如果想对胞浆免疫球蛋白重链或轻链定量，是不可以的吧？比如我想分析病人不同时期IgG/IgA的含量变化，流式是不能解决的吧？
谢谢老师。

niwanmao

首先感谢您的分享，我也是第一次接触这个概念，找到了这篇原文，大致看了下，确实很有意义 ，是临床的一个新用途啊。文章链接见：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4817101/

接下来试着按照我的理解回答一下：
1、文中的DNA指数＝轻链阳性细胞群DNA MFI /  轻链阴性群的DNA MFI，这个计算的图在1985年的一篇文章里面有（如下图）


2、文中的CIG指数＝二倍体G0/G1期轻链阳性细胞群 轻链MFI/ 二倍体G0/G1期 轻链阴性群 轻链MFI
CIG指数≥3.6表示存在较明显成群的二倍体轻链阳性浆细胞，所以进展慢，而<3.6往往意味着进展快。

3、DNA Stem line其实指的是非二倍体的轻链限制性浆细胞群，例如有一个DI为1.1的，一个DI为0.7的，那么就说明存在两个DNA Stem Line了。

4、MFI是相对单位，英文叫Arbitary Unit，不是绝对值。膜表面分子可以通过ABC进行绝对分子数量定量，但胞内应该挺难，也可以尝试一下，但我觉得意义不大，前面这两个指数已经被SWOG S0120接纳了，为什么不用呢？

FCMao

@niwanmao 添加附件老是失败

FCMao

niwanmao 发表于 2017-1-5 22:48
首先感谢您的分享，我也是第一次接触这个概念，找到了这篇原文，大致看了下，确实很有意义 ，是临床的一个 ...

谢谢倪老师的解答，我清楚了。还有一点不清楚，我看到1985年的文章说采用CIg指数是因为发现个体间差异大，CV值在30-80%之间，所以才采用CIg指数。但是这个CIg指数能表示CIg含量吗？如果可以表示，轻链阳性的轻链MFI肯定是高的，阴性的轻链MFI肯定是低的，两者比值是高的。我看到2015年MM中表明CIg指数＜2.8是骨髓瘤的不良预后因素，而2016年研究中表明CIg指数＜3.6是AMG进展为MM的不良预后因素。均表示CIg低是不好的。不知道该怎么理解？谢谢。

niwanmao

FCMao 发表于 2017-1-8 16:56
谢谢倪老师的解答，我清楚了。还有一点不清楚，我看到1985年的文章说采用CIg指数是因为发现个体间差异大 ...

这个确实理解起来有点困难，按照我的理解，我画了两幅图，你看看是否正确，一起讨论一下：
1、这是正常浆细胞图，二倍体区域，存在Ig阳性（褐色）和Ig阴性（深红色）细胞，两者Ig MFI相除，就得到CIG指数，是比较大的。


2、这个图是存在异倍体（即文中所指的DNA Stem Line）浆细胞，用亮红色表示，由于这类异常浆细胞不是二倍体，所以不参与CIG指数计算。因此，计算CIG指数时，仍是用褐色的二倍体Ig阳性细胞除以深红色的二倍体Ig阴性细胞，很明显，肯定是指数偏低的。所以认为CIG指数低预后差。


以上仅是粗浅的理解，不一定正确，请大家多多讨论。