TH1/TH17的补偿和对照设置问题

lewiski

倪老师和各位老师好啊，现在我要测TH17/TH1细胞在外周血的比例，现在有个问题有点困扰我
就是设置补偿我需要哪几个管子。。
下面是我的想法，不知道对不对
CD3,CD4， IFN-γ，IL-17单染管（4个）然后一个标本管（全染），一个iso管做unstain 管
一共六个管子

CD3,CD4单染管和标本以及iso管子  在刺激活化后加2ul 标表面marker的抗体，孵育好了过后固定破膜后，再把IFN-γ，IL17单染管、标本管和iso管加入标记细胞因子的抗体。

最后上机根据iso管来调PMT，，其他4个单染管设补偿。

第一次做，不知道对不对，谢谢啦

niwanmao

你的荧光素分别是什么？

lewiski

niwanmao 发表于 2017-2-25 21:07
你的荧光素分别是什么？

我的CD3-fitc，CD4-apc  IFN-γ--pecy7，IL17a-percp5.5

lewiski

niwanmao 发表于 2017-2-25 21:07
你的荧光素分别是什么？

CD4还有一个PE的抗体

niwanmao

lewiski 发表于 2017-2-25 21:35
我的CD3-fitc，CD4-apc  IFN-γ--pecy7，IL17a-percp5.5

CD3、CD4的散点图单阳性分群十分明显，调节补偿可以根据单阳性细胞群直接调节。而IFN-γ和IL17a 分群也清楚，实际上可以直接测，但为了投稿时能够有更有利的证据给评审看，所以PE-cy7和PerCP-cy5.5两个通道可以找一个CD4或CD8来调节补偿，而不是用IFN-γ和IL17a，因为后两者荧光太弱，调不太好。尽管象我们以前的帖子说过的，串联染料不同批次之间的补偿值会有所不同，但还是有一定参考意义 的。