我的Treg在哪里

cocoyan · 发表于 2017-3-28 23:31:26

今天第一次做小鼠脾脏Treg细胞
做完了找不到三阳的细胞，或者说FOXP3阳性细胞基本没有
请老师指导

niwanmao · 发表于 2017-3-29 07:54:33

foxP3没染好，原因不外乎两种：
破膜剂
foxP3抗体

只能逐一排除。

774055480 · 发表于 2017-3-29 09:19:57

你的脾脏样本里CD25的表达好多呀，是新鲜未刺激的小鼠脾脏吗？我做的新鲜的脾脏中CD25基本没有，但是FOXP3倒是有，但是也不多

cocoyan · 发表于 2017-3-29 17:18:45

774055480 发表于 2017-3-29 09:19
你的脾脏样本里CD25的表达好多呀，是新鲜未刺激的小鼠脾脏吗？我做的新鲜的脾脏中CD25基本没有，但是FOXP3 ...

能发您的图看看嘛

cocoyan · 发表于 2017-3-29 17:20:03

niwanmao 发表于 2017-3-29 07:54
foxP3没染好，原因不外乎两种：
破膜剂
foxP3抗体

老师怎么排除？一更换破膜剂？二更换FOXP3抗体？
我用的BD 的破膜剂，4度破膜40分钟，时间不够吗

cocoyan · 发表于 2017-3-29 17:28:35

niwanmao 发表于 2017-3-29 07:54
foxP3没染好，原因不外乎两种：
破膜剂
foxP3抗体

老师我还有问题咨询您，我CD4-FITC CD25-APC FOXP3-PE
同型对照只设置了APC 的与PE的
问题两个
一、对照管用不用破膜？
二、如果需要破膜的话那我的PE同型对照是不是跟FOXP3-PE抗体一样在破膜后加入？
三、我的实验室离4度离心机很远，我用的室温离心机离心可以吗

niwanmao · 发表于 2017-3-30 07:51:24

cocoyan 发表于 2017-3-29 17:28
老师我还有问题咨询您，我CD4-FITC CD25-APC FOXP3-PE
同型对照只设置了APC 的与PE的
问题两个

对照管要破膜，但问题不在于这个，离心的温度也不是关键。
我要表达的意思是：FoxP3我们做过一些，分群是很好的，而这里分不开群，就需要找原因了。

774055480 · 发表于 2017-3-30 09:07:59

CD25我没有染出来，想着可能是因为未刺激的脾脏组织中基本没有吧，可能也因为没染好

niwanmao · 发表于 2017-3-30 10:11:01

774055480 发表于 2017-3-30 09:07
CD25我没有染出来，想着可能是因为未刺激的脾脏组织中基本没有吧，可能也因为没染好
...

跟CD25抗体的克隆号可能会有关系。

niwanmao · 发表于 2017-3-30 10:11:40

cocoyan 发表于 2017-3-29 17:20
老师怎么排除？一更换破膜剂？二更换FOXP3抗体？
我用的BD 的破膜剂，4度破膜40分钟，时间不够吗 ...

BD什么破膜剂？有些破膜剂无法破核膜的，需要注意！！！！

账号		自动登录	找回密码
密码			加入流式中文网

[淋巴细胞相关] 我的Treg在哪里