DC细胞,用CD11C,CD40,MHCII三种荧光标记

zsl66

如题,用CD11去标记刚从小鼠骨髓分化出来的单核细胞,默认为CD11C+是DC细胞.其次再在CD11C+的细胞里看CD40,MHCII的荧光强度和阳性率.
这个实验我怎么设计啊老师?具体步骤是咋样的.
我知道要用3个单染管去调节补偿. 具体怎么调节呢?CD40对应的是PE  MHCII对应的是FITC   CD11C是Percp-cy5.5.  我们那台机器都是488nm激发的  3个都要补偿应该. 具体怎么操作呀老师 能说详细点吗 谢谢啦啊  

niwanmao

为啥不加CD14排除单核细胞？
CD11c单核细胞也是阳性的。

zsl66

niwanmao 发表于 2017-5-9 13:25
为啥不加CD14排除单核细胞？
CD11c单核细胞也是阳性的。

因为我的DC培养了7天了 应该已经完全分化了不再是单核细胞了吧 老师就让我这样测呢  请问怎样调补偿 涉及了3种荧光  我要在CD11C+阳性细胞里面看MHCII和CD40就行  就是3种荧光都要补偿吧  

zsl66

zsl66 发表于 2017-5-9 19:16
因为我的DC培养了7天了 应该已经完全分化了不再是单核细胞了吧 老师就让我这样测呢  请问怎样调补偿 涉及 ...

我的是小鼠的DC老师     cd14是测得人的   

niwanmao

zsl66 发表于 2017-5-9 19:31
我的是小鼠的DC老师     cd14是测得人的

你参考一下这篇帖子看：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3302-1-1.html

补偿不是问题，这几个抗体分群应该都还可以的。

zsl66

niwanmao 发表于 2017-5-9 22:22
你参考一下这篇帖子看：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3302-1-1.html

补偿不是问题，这几个抗体分 ...

就是具体步骤我应该怎么去操作阿  先上什么管 要有染了3种荧光的管子吗  我现在设计的是一共5个管子 1个空白只有细胞,1个单染Percp-cy5.5,1个单染PE,1个单染FITC, 1个染了3种荧光  
是这样吗  具体染了3种的我怎么去看

niwanmao

zsl66 发表于 2017-5-10 13:45
就是具体步骤我应该怎么去操作阿  先上什么管 要有染了3种荧光的管子吗  我现在设计的是一共5个管子 1个 ...

一批细胞做这样的对照只需要做一次即可，可以这么设，具体怎么调节，看一下补偿方面的帖子就明白了。
染了三种，就根据你要检测的细胞特征圈门即可。

angke123

空白细胞不要也可以，关键是要有isotype，可以三个加到同一管细胞里，排除非特异性荧光。先上isotype调节通道电压，再分别上三个单染管调节补偿，最后上实验组，就是三色一起染的。