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[功能检测] ROS用flowing分析结果请教

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发表于 2017-5-13 11:56:38 | 显示全部楼层 |阅读模式

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各位前辈,之前用BD的流式仪做了ROS的检测,染料是DCFH,用flowing对结果进行了处理,可是不是太懂直方图叠加结果的意义,就是浓度2(绿色线)和浓度3(紫色线)的双峰有些不太一样啊,是什么意思?
还有那个数据表里要采用哪个数据呢?
@niwanmao
怎么的结果才表示有ROS的产生?

下面三个直方图从左到右浓度依次增大

下面三个直方图从左到右浓度依次增大
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发表于 2017-5-14 09:29:22 | 显示全部楼层
你这三个结果,百分比几乎没有变化,即使改用MFI,至少绿色和紫色我觉得肯定是绿色的MFI大,所以这里就存在矛盾。建议再重复两次,如果依然如此,并且你确保标本处理没有问题,那么就需要改实验方案了。
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 楼主| 发表于 2017-5-14 10:51:42 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-5-14 09:29
你这三个结果,百分比几乎没有变化,即使改用MFI,至少绿色和紫色我觉得肯定是绿色的MFI大,所以这里就存在 ...

非常感谢老师,我觉得是我上机时没有调好参数。请问老师做ROS的流式时要怎么调电压呢?还有我的结果图中为什么右边会出现一个小峰呢?
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发表于 2017-5-14 11:15:04 | 显示全部楼层
喵喵的兔子 发表于 2017-5-14 10:51
非常感谢老师,我觉得是我上机时没有调好参数。请问老师做ROS的流式时要怎么调电压呢?还有我的结果图中 ...

直方图看不出原因,需要结合FSC/SSC,以及散点图一起看。
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发表于 2017-5-15 08:47:05 | 显示全部楼层
喵喵的兔子 发表于 2017-5-14 10:51
非常感谢老师,我觉得是我上机时没有调好参数。请问老师做ROS的流式时要怎么调电压呢?还有我的结果图中 ...

我们做的时候 用不染DCFH的 细胞调整电压 将 直方图调至10E2 或者10E3以内,图跟你第2个图差不多 然后 上样。  一般 用染色的 对照细胞,设定bar。样品分析出来 是双峰  比你这上面的图更明显些 左峰表示 没有ROS的细胞,右边表示 产生ROS的细胞 。我们也做出来过单峰的,整体右移,论坛里有人讲过 跟上样时间有关系,我觉得 应该跟样品处理 有关系 。
不知道 有没有帮助。有不对的地方,希望老师们指正

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