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再谈同型对照:是该放弃这过时的东西了

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发表于 2017-5-22 20:47:07 | 显示全部楼层 |阅读模式

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同种型对照是与目标抗体有着相同重链和轻链,仅仅是靶点不同的抗体。真正匹配的同型对照除了要物种、亚型(IgG1、IgG2a、IgG2b等)一致,还需要有着相同的非特异性结合能力、浓度、荧光素:抗体比。所以说,要找到一个正确的同型对照,比你找到一个男/女朋友可能还要难。

同型对照真的这么重要吗?
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综上,以前认为同型异型对照可以显示出背景或非特异性结合,这个假设是应该被否定的。 如果文章评审因为缺少同型对照而拒绝您的论文,你现在可以用前面这篇文章来反驳他了。 同样地,如果有人正在使用同种型对照来确定背景染色水平,把这篇文章给他们看,耐心地劝说他们,用同型对照实在浪费时间和金钱。


参考源:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27731950
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发表于 2017-6-25 21:48:01 | 显示全部楼层
ps654321 发表于 2017-5-22 21:28
有个请教,单一细胞株,比如要验证CD20+,利用Fc,
设组:
1、空白细胞+Fc阻断剂(这里阻断剂能否去掉?)

阻断剂不能去掉。

为何不可以去掉呢? 空白细胞上又没染染料,上流式也不会发光,加阻断剂也不是为了阻止自发荧光? 为何还要多加阻断剂呢?
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发表于 2017-5-22 21:28:49 | 显示全部楼层
本帖最后由 ps654321 于 2017-5-22 21:32 编辑

有个请教,单一细胞株,比如要验证CD20+,利用Fc,
设组:
1、空白细胞+Fc阻断剂(这里阻断剂能否去掉?)
2、CD20 PE+Fc阻断剂

是否这是正确使用Fc阻断剂的方式?因为看了
就是说,你在单标时,使用空白细胞+阻断剂,即可代替以前苦苦追寻的同型对照

有点疑惑
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 楼主| 发表于 2017-5-22 21:41:52 | 显示全部楼层
ps654321 发表于 2017-5-22 21:28
有个请教,单一细胞株,比如要验证CD20+,利用Fc,
设组:
1、空白细胞+Fc阻断剂(这里阻断剂能否去掉?)

阻断剂不能去掉。
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发表于 2017-5-23 08:39:02 | 显示全部楼层
弱弱的问一下,一般不是可以利用同型对照来设门吗,为什么“图2”中加了同型对照后,设门位置就不对了呢?却还是以空白对照的位置来设门,而不能以同型对照来设门呢?谢谢!
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发表于 2017-5-23 08:58:20 | 显示全部楼层
除了商品化的阻断剂,我看血清也可以,那么做猴子的细胞最好用猴的血清做阻断剂吧?
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发表于 2017-5-23 09:01:44 | 显示全部楼层
还有,商品化的Fc阻断剂贵吗,还没用过
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 楼主| 发表于 2017-5-23 10:59:41 | 显示全部楼层
家的感觉 发表于 2017-5-23 08:39
弱弱的问一下,一般不是可以利用同型对照来设门吗,为什么“图2”中加了同型对照后,设门位置就不对了呢? ...

请仔细看帖,同型对照是祖传的观念,并且可以说90%以上的同型对照都是没选对的,因为谁都没有验证过非特异结合能力、荧光:抗体比等等是否一致,只是厂家说是就是。实际上Fc阻断就已经代替掉了同型对照的作用。
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 楼主| 发表于 2017-5-23 11:04:58 | 显示全部楼层
mingxu95 发表于 2017-5-23 09:01
还有,商品化的Fc阻断剂贵吗,还没用过

商品化的Fc Blocking solution是偏贵的,可以考虑AB型血清。如果是猴子,我记得猴子应该也
是有血型的,可能也需要注意血型,否则细胞要被血清中的血型抗体破坏。
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发表于 2017-5-24 09:36:01 | 显示全部楼层
学习了,一直在对做不做同型对照矛盾着,丹麦的科研人员是有心人,楼主也是有心人
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发表于 2017-5-25 22:46:30 | 显示全部楼层
同型对照可以消除自发荧光,FC受体介导的抗体结合,非特异性抗体结合。。。而Fc阻断只是消除了FC受体介导的抗体结合
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