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[淋巴细胞相关] 我的小鼠CT26肿瘤组织TIL分析Treg图形有什么问题

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发表于 2017-6-7 09:42:25 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
各位老师和大神看看我的流式细胞Treg分析有啥问题?本人初学者,刚接触流式细胞仪器。

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 楼主| 发表于 2017-6-7 09:55:59 | 显示全部楼层
我的Treg怎么表达这么高呀?问题出现在哪里?
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发表于 2017-6-7 10:57:05 | 显示全部楼层
jimm 发表于 2017-6-7 09:55
我的Treg怎么表达这么高呀?问题出现在哪里?

我觉得你这个抗体组合有没有问题?为什么这么多CD45-的细胞?
正常情况下,所以的白细胞都是CD45+的,另外,你没有用CD3设T细胞的门,这个不好,因为CD4弱表达可能是单核细胞,并非T细胞。
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 楼主| 发表于 2017-6-7 11:19:26 | 显示全部楼层
本帖最后由 jimm 于 2017-6-7 11:20 编辑

CD45-肿瘤细胞大概占77%多,CD45+大概占21%左右,没加上CD3,估计会影响Treg结果。
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发表于 2017-6-7 15:26:37 | 显示全部楼层
我觉得FOXP3最好做个FMO的对照,不过看你foxp3明显分了俩群,看一下同型对照的图是不是也是俩群呢,之前没遇到过这么高的。肿瘤组织组非特异性染色很重,还是需要染个CD3的。
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发表于 2017-6-7 18:19:37 | 显示全部楼层
jimm 发表于 2017-6-7 11:19
CD45-肿瘤细胞大概占77%多,CD45+大概占21%左右,没加上CD3,估计会影响Treg结果。
...

我建议再画一幅散点图,看看所谓FoxP3+的细胞在CD45是阴性还阳性?另外,再看一下所谓foxP3+的细胞在FSC/SSC图上在什么位置?
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 楼主| 发表于 2017-6-8 09:28:13 | 显示全部楼层
谢谢老师的分析,这个就是Foxp3+细胞在CD45+位置以及在FSC/SSC的位置图。
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发表于 2017-6-8 15:18:16 | 显示全部楼层
jimm 发表于 2017-6-8 09:28
谢谢老师的分析,这个就是Foxp3+细胞在CD45+位置以及在FSC/SSC的位置图。

这些都是死细胞为主,是假阳性。
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 楼主| 发表于 2017-6-8 16:50:14 | 显示全部楼层
可是我用了Live&dead染料去除死细胞了呀?组织单细胞悬液也用了percoll分离液纯化了,怎么还有死细胞干扰呢?
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发表于 2017-9-6 21:41:51 | 显示全部楼层
请问能告诉我一样你的肿瘤样品是怎么处理的吗?越详细越好,非常感谢!
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