流式检测细胞LC3II-AF647分群明显，正常吗？

lisa-apple

倪老师及各位站友好：
        之前在流式中文网上看到检测自噬的几个方法，我尝试了用流式检测肝细胞系的LC3II-AF647（AF647为荧光二抗）情况，图一是空白管和只加了荧光二抗AF647的情况，图二是实验及对照组，（用的Ebioscience的Foxp3固定破膜kit来固定和破膜），这次结果和之后我做的很多次都发现我染的LC3II很容易分群。这跟您整理的protocol差别蛮大，所以我想请教几个问题：

图一

图二

流式中文网上的图

1. 我染出来的这种分群结果正常吗？不知道您们有没有遇到过类似的图形？
2. 我在检测的时候用的APC通道，假如分群明显的图是正常的，在调电压的时候需要将电压调低使分界点调到10^3附近吗？

niwanmao

图二的三个峰分别对应什么标本？能否同时把FSC/SSC放上来？

lisa-apple

niwanmao 发表于 2017-6-12 18:20
图二的三个峰分别对应什么标本？能否同时把FSC/SSC放上来？

倪老师，不好意思，忘记添上去了。图二的三个峰从上往下依次是我的一个刺激蛋白+氯喹组、只加氯喹组和空白组。FSC/SSC的形态都差不多，只放了这一张。

图三

niwanmao

lisa-apple 发表于 2017-6-12 19:09
倪老师，不好意思，忘记添上去了。图二的三个峰从上往下依次是我的一个刺激蛋白+氯喹组、只加氯喹组和空 ...

LC3我只是翻译过这些Protocol，自己没做过，所以可能无法给你更实际的指导，但是我觉得这样的FSC/SSC，以及这样的图形，应该是结果可信的。

lisa-apple

niwanmao 发表于 2017-6-13 11:05
LC3我只是翻译过这些Protocol，自己没做过，所以可能无法给你更实际的指导，但是我觉得这样的FSC/SSC，以 ...

好的，谢谢倪老师